目的研究敲低Krüppel樣因子4（KLF4）基因?qū)AW264.7巨噬細(xì)胞極化的影響。方法采用RNA干涉技術(shù)（RNAi）構(gòu)建敲低KLF4的慢病毒載體,轉(zhuǎn)染RAW264.7巨噬細(xì)胞獲得KLF4基因沉默的穩(wěn)定細(xì)胞株。采用白細(xì)胞介素4（IL-4）刺激野生型、 KLF4敲低組和陰性對(duì)照組巨噬細(xì)胞,反轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)細(xì)胞誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）、 IL-1β、腫瘤壞死因子α（TNF-α）及精氨酸酶1（Arg1）、 IL-10、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）的mRNA水平,免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)和定位巨噬細(xì)胞iNOS及Arg1蛋白。結(jié)果敲低KLF4基因后, RAW264.7細(xì)胞的iNOS、 IL-1β的mRNA含量明顯增高,而TNF-α、Arg1、 IL-10及TGF-β的mRNA含量則明顯降低; IL-4處理野生型RAW264.7細(xì)胞后KLF4、 Arg1、 IL-10及TGF-β的mRNA的表達(dá)增加, iNOS、 IL-1β及TNF-αmRNA的表達(dá)減少; IL-4處理敲低KLF4的細(xì)胞,其iNOS、 IL-1β及TNF-αmRNA含量低于野生型組,但高于陰性對(duì)照組,而Arg1、 IL-10... 

【文章來(lái)源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2020,36(09)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)12 h后巨噬細(xì)胞iNOS、 IL-1β、 TNF-α、 Arg1、 IL-10及TGF-β的 mRNA表達(dá)

實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示, IL-4處理 RAW264.7 細(xì)胞12 h后, IL-4組細(xì)胞的KLF4 mRNA 相對(duì)表達(dá)量比WT組細(xì)胞明顯增加, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05, 圖2)。2.3 IL-4處理野生型RAW264.7 細(xì)胞后, M1型標(biāo)志物 iNOS、 IL-1β及TNF-α mRNA的表達(dá)量降低, M2型標(biāo)志物 Arg1、 IL-10及TGF-β mRNA的表達(dá)量增加

實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示, 與WT對(duì)照組相比, IL-4處理野生型 RAW264.7細(xì)胞12 h后, iNOS、 IL-1β 及TNF-α基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯降低, Arg1、 IL-10及TGF-β基因的mRNA的相對(duì)表達(dá)量明顯增加, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01, 圖3)。2.4 IL-4處理shKLF4-RAW264.7 細(xì)胞后, M1型細(xì)胞標(biāo)志物 iNOS、 IL-1β及TNF-α mRNA表達(dá)量降低, M2型細(xì)胞標(biāo)志物 Arg1、 IL-10及TGF-β mRNA表達(dá)量增加

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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