側(cè)孢短芽孢桿菌(Brevibacillus laterosporus)S62-9產(chǎn)生的抗菌肽(Brevibacillin,BBL)是一種非核糖體多肽,由非核糖體肽合成酶催化合成。本研究所用基因是從側(cè)孢短芽孢桿菌(B. laterosporus)S62-9質(zhì)粒基因組中克隆的一個非核糖體肽合成酶的腺苷化結(jié)構(gòu)域(Nonribosomal peptide synthetase adenylation, NRPS-A)基因,根據(jù)此NRPS-A基因構(gòu)建了pET21b-N1、pET21b-B2、pET22b-N1、pET22b-N3四個重組表達(dá)載體。將以上重組表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)化E. coli BL21、E. coli Rosetta(DE3)和E. coli Origami B(DE3)受體細(xì)胞,并用1 mmol/L異丙基β-d-硫代吡喃半乳糖吡喃糖苷(IPTG)在16°C 200 r/min下進(jìn)行誘導(dǎo),將誘導(dǎo)產(chǎn)物用SDS-PAGE檢測分析。結(jié)果顯示,4種重組載體在E.coliBL21中均無表達(dá),在E.coliRosetta(DE3)大量表達(dá)但均以包涵體形式存在,在E. coli Origami B(...

【文章來源】： 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2020,43(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株和質(zhì)粒載體
    1.2 試劑
    1.3 方法
        1.3.1 質(zhì)粒的提取
        1.3.2 引物設(shè)計
        1.3.3 NRPS-A結(jié)構(gòu)域基因的PCR擴(kuò)增
        1.3.4 載體構(gòu)建與序列分析
        1.3.5 NRPS-A結(jié)構(gòu)域基因的表達(dá)
        1.3.6 可溶性融合蛋白的純化
        1.3.7 氨基酸腺苷化活性測定
2 結(jié)果與分析
    2.1 NRPS-A結(jié)構(gòu)域基因的克隆
    2.2 氨基酸序列分析
    2.3 目的蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.3.1 不同表達(dá)受體的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.3.2 可溶性蛋白的純化
    2.4 特異性底物檢測
3 結(jié)論與討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]密碼子中的密碼:密碼子偏好性與基因表達(dá)的精細(xì)調(diào)控 [J]. 任桂萍,董瓔瑩,黨云琨.  中國科學(xué):生命科學(xué). 2019(07)
[2]非核糖體肽合成酶基因腺苷�；Y(jié)構(gòu)域序列克隆及分析 [J]. 薛永常,張成鎖,李根.  微生物學(xué)雜志. 2019(01)
[3]一種新型抗菌肽基因決定簇的克隆與序列結(jié)構(gòu)特征 [J]. 劉洋,柯曉靜,于宏偉,郭潤芳.  河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2019(01)
[4]非核糖體肽合成酶研究進(jìn)展 [J]. 韓夢瑤,陳晶晶,喬云明,朱平.  藥學(xué)學(xué)報. 2018(07)
[5]極端嗜熱酸性α-淀粉酶PFA在枯草芽孢桿菌中的高效分泌表達(dá) [J]. 袁林,曾靜,郭建軍,郭浩,楊罡,陳俊.  食品科學(xué). 2018(18)
[6]密碼子優(yōu)化提高多粘類芽孢桿菌β-葡萄糖苷酶異源表達(dá)量 [J]. 陳蔭楠,劉震,石賢愛,王祖鑫.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2017(04)
[7]含抗菌肽基因的天然質(zhì)粒在枯草桿菌中的表達(dá) [J]. 張楠,劉洋,于宏偉,柯曉靜,郭潤芳,賈英民.  食品科學(xué). 2017(08)
[8]側(cè)孢短芽孢桿菌S62-9抗菌肽基因的初步定位 [J]. 張楠,劉洋,柯曉靜,于宏偉,郭潤芳,賈英民.  河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2016(05)
[9]海洋放線菌代謝產(chǎn)物、非核糖體多肽、腺苷化結(jié)構(gòu)域研究進(jìn)展 [J]. 陸勝利,祁超.  華中師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2015(01)
[10]海洋稀有放線菌Salinispora arenicola CNP193基因組新穎PKS和NRPS基因簇的發(fā)掘 [J]. 房耀維,劉姝,王淑軍,呂明生,焦豫良,陳國強(qiáng),潘建梅,牛軍.  海洋科學(xué). 2014(12)

博士論文
[1]枯草桿菌fmb60的NRPS和Ⅰ型PKS基因簇代謝產(chǎn)物發(fā)掘及其生物活性研究[D]. 楊杰.南京農(nóng)業(yè)大學(xué). 2017

碩士論文
[1]NRPS-A在側(cè)孢短芽孢桿菌S62-9抗菌肽生物合成中的功能分析[D]. 劉洋.河北農(nóng)業(yè)大學(xué). 2018
[2]二硫鍵氧化還原酶DsbA/DsbC協(xié)助瑞替普酶包涵體體外復(fù)性研究[D]. 王俊雄.浙江大學(xué). 2015



本文編號：3545431