側(cè)孢短芽孢桿菌(Brevibacillus laterosporus)S62-9產(chǎn)生的抗菌肽(Brevibacillin,BBL)是一種非核糖體多肽,由非核糖體肽合成酶催化合成。本研究所用基因是從側(cè)孢短芽孢桿菌(B. laterosporus)S62-9質(zhì)粒基因組中克隆的一個非核糖體肽合成酶的腺苷化結(jié)構(gòu)域(Nonribosomal peptide synthetase adenylation, NRPS-A)基因,根據(jù)此NRPS-A基因構(gòu)建了pET21b-N1、pET21b-B2、pET22b-N1、pET22b-N3四個重組表達載體。將以上重組表達載體分別轉(zhuǎn)化E. coli BL21、E. coli Rosetta(DE3)和E. coli Origami B(DE3)受體細(xì)胞,并用1 mmol/L異丙基β-d-硫代吡喃半乳糖吡喃糖苷(IPTG)在16°C 200 r/min下進行誘導(dǎo),將誘導(dǎo)產(chǎn)物用SDS-PAGE檢測分析。結(jié)果顯示,4種重組載體在E.coliBL21中均無表達,在E.coliRosetta(DE3)大量表達但均以包涵體形式存在,在E. coli Origami B(...

【文章來源】： 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2020,43(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株和質(zhì)粒載體
    1.2 試劑
    1.3 方法
        1.3.1 質(zhì)粒的提取
        1.3.2 引物設(shè)計
        1.3.3 NRPS-A結(jié)構(gòu)域基因的PCR擴增
        1.3.4 載體構(gòu)建與序列分析
        1.3.5 NRPS-A結(jié)構(gòu)域基因的表達
        1.3.6 可溶性融合蛋白的純化
        1.3.7 氨基酸腺苷化活性測定
2 結(jié)果與分析
    2.1 NRPS-A結(jié)構(gòu)域基因的克隆
    2.2 氨基酸序列分析
    2.3 目的蛋白的誘導(dǎo)表達
        2.3.1 不同表達受體的誘導(dǎo)表達
        2.3.2 可溶性蛋白的純化
    2.4 特異性底物檢測
3 結(jié)論與討論


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]枯草桿菌fmb60的NRPS和Ⅰ型PKS基因簇代謝產(chǎn)物發(fā)掘及其生物活性研究[D]. 楊杰.南京農(nóng)業(yè)大學(xué). 2017

碩士論文
[1]NRPS-A在側(cè)孢短芽孢桿菌S62-9抗菌肽生物合成中的功能分析[D]. 劉洋.河北農(nóng)業(yè)大學(xué). 2018
[2]二硫鍵氧化還原酶DsbA/DsbC協(xié)助瑞替普酶包涵體體外復(fù)性研究[D]. 王俊雄.浙江大學(xué). 2015



本文編號：3545431