隨著資源短缺問(wèn)題的加劇,人們開(kāi)始將目光放在可再生資源上,作為世界上產(chǎn)量極豐富的纖維素資源,其可通過(guò)纖維素酶的分解產(chǎn)生葡萄糖等,為進(jìn)一步的加工提供原料。本實(shí)驗(yàn)在新的纖維素酶基因克隆、表達(dá)、酶學(xué)性質(zhì)和功能位點(diǎn)上做了系統(tǒng)的研究,主要研究?jī)?nèi)容如下:1.從低溫氣候的西藏地區(qū)采樣獲得了兩種可以分解纖維素的菌株Microbacterium kitamiense和Zhihengliuella halotolerans,并成功克隆了四個(gè)新型纖維素酶基因,Mkcel5A、MkcelB、ZhcelA和ZhcelB,通過(guò)剛果紅染色法驗(yàn)證這四個(gè)基因編碼的蛋白有纖維素酶活力,進(jìn)一步的表達(dá)發(fā)現(xiàn)其中三個(gè)蛋白為包涵體,另一個(gè)表達(dá)量較低。2.對(duì)四個(gè)基因中的一種纖維素酶基因MkCel5A進(jìn)行深入研究,結(jié)果顯示其基因的開(kāi)放閱讀框大小為1449 bp,編碼了一個(gè)大小為482個(gè)殘基的多肽,分子量為51.38 kDa。序列分析表明MkCel5A蛋白屬于糖基水解酶家族5（GH5）,并且與內(nèi)切葡聚糖酶同源性很高。對(duì)MkCel5A蛋白經(jīng)過(guò)復(fù)性和純化處理后發(fā)現(xiàn),其最適催化溫度為25℃,最適催化pH為7.0,金屬離子Rb⁺

【文章來(lái)源】：安徽師范大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

農(nóng)業(yè)廢棄物中植物細(xì)胞壁的組成

由幾百至幾萬(wàn)個(gè)葡萄糖小分子通過(guò)β-1,4 糖苷鍵形成密集的結(jié)構(gòu)，其結(jié)構(gòu)圖如圖1-2，化學(xué)分子式為（C6H10O5）n，常溫及高溫下熱穩(wěn)定性都十分好，正常

Tilbeurh等人發(fā)現(xiàn)來(lái)自里氏木霉 Trichoderma reesei的外水解酶（CBH I）被木瓜蛋白酶水解后的產(chǎn)物有兩種，差但能水解可溶性纖維素的較大片段，另一種是無(wú)法水素的較小片段[18]。在這之后對(duì)纖維素酶的深入研究發(fā)現(xiàn)部分都由三個(gè)結(jié)構(gòu)組成，纖維素結(jié)合域（CelluloseD）和催化結(jié)構(gòu)域（Catalytic domain, CD），CBD 和 Cer）連接。整個(gè)纖維素酶的形狀如同一個(gè)拖著尾部的球部，中間是高度糖基化、柔韌性較好、富含羥基類氨基橋，尾部是折疊好的 CBD，其中纖維素酶的催化和結(jié)合其形狀如圖 1-3 所示[21]。一般情況下來(lái)源于細(xì)菌的纖維間有一個(gè) 135 度的夾角，而真菌類纖維素酶的兩個(gè)結(jié)構(gòu)[22]。


本文編號(hào)：3543719