含硫氨基酸在不同的生物體中具有重要生物學(xué)功能,是一類功能性氨基酸,參與機體的功能調(diào)控,在DNA和蛋白質(zhì)的修飾、細胞的免疫應(yīng)答和氧化還原反應(yīng)等過程中發(fā)揮作用。轉(zhuǎn)硫途徑是細胞內(nèi)代謝的核心途徑,因此,精確控制直接參與合成含硫氨基酸的轉(zhuǎn)硫途徑對于維持正常細胞功能至關(guān)重要。嗜熱四膜蟲是一種重要的單細胞模式生物,具有靈敏的環(huán)境響應(yīng)機制和精細的細胞代謝途徑。然而其細胞內(nèi)轉(zhuǎn)硫代謝途徑并不清楚。本研究首次研究了嗜熱四膜蟲中轉(zhuǎn)硫途徑關(guān)鍵酶胱硫醚-γ-裂解酶,對其重組表達,活性分析和細胞內(nèi)功能進行了系統(tǒng)分析,獲得主要結(jié)果如下:1.嗜熱四膜蟲中胱硫醚-γ-裂解酶的酶活鑒定通過生物信息學(xué)分析,鑒定了嗜熱四膜蟲進化上保守的胱硫醚-γ-裂解酶基因（cystathionineγ-lyase 1,CGL1,TTHERM₀0052400）,開放閱讀框1230 bp,編碼409個氨基酸。在生長期高水平表達,而在饑餓期和有性生殖期維持在較低的表達水平。體外人工合成CGL1基因,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pGST-CGL1,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）表達重組蛋白,親和層析獲得純化的GST-Cgl1。酶活分析表明... 

【文章來源】：山西大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

含硫氨基酸代謝[1]

ation pathway，F(xiàn)TP），將源自從頭合成途徑產(chǎn)生的半胱氨酸轉(zhuǎn)進一步通過甲硫氨酸循環(huán)轉(zhuǎn)化為甲硫氨酸[7]。在動物和部分途徑，而是通過胱硫醚 β-合酶（cystathionine β-synthase，C酶（cystathionine γ-lyase，CGL）作用的反向轉(zhuǎn)硫途徑（reverse traRTP），將源自甲硫氨酸分解代謝的同型半胱氨酸用于合成半體信號分子硫化氫（hydrogen sulfide，H2S）等[8]。寄生性原蟲（Entamoeba histolytic）具有不完全的正向轉(zhuǎn)硫途徑，缺種關(guān)鍵酶的基因，由 2 種甲硫氨酸-γ-裂解酶裂解甲硫氨酸、酸，但不能合成或裂解胱硫醚[9]�？耸襄F蟲（Trypanosoma CGL，在鞭毛體高表達，通過反向轉(zhuǎn)硫途徑產(chǎn)生半胱氨酸[10]。T 和 CS 活性，參與從頭合成途徑合成半胱氨酸[10,11]。弓形蟲（ CS、CGL 和 CBS 僅在卵囊和子孢子階段特異性表達，可能硫途徑兩種途徑合成半胱氨酸[7]。因此，不同原生動物中進。

第一章 文獻綜述各種生物體，通常為同型四聚體結(jié)構(gòu)，每個單體具點構(gòu)成的 N-末端結(jié)構(gòu)域，磷酸吡哆醛接合結(jié)構(gòu)域個緊密接觸的單體形成活性二聚體，在 A 亞基和點（圖 1.3），隨后的位點在 C 亞基和 D 亞基之間裂解酶屬于磷酸吡哆醛依賴酶中的 γ 家族，催化氨[16]。在反向轉(zhuǎn)硫化途徑中催化 L-胱硫醚 α，γ 的消 α-酮丁酸[17]。


本文編號：3541765