病毒樣顆粒（Virus-Like Particle,VLP）是由一個或多個病毒結構蛋白組裝形成的顆粒狀結構,與天然病毒粒子形態(tài)、抗原性相似。VLP缺失病毒的遺傳物質,沒有復制和感染能力。VLP的免疫原性良好,研制快速,制備成本較低并且安全,在應對新發(fā)、突發(fā)病毒疾病的疫苗研制中具有獨特優(yōu)勢。桿狀病毒表達系統(tǒng)是常用的真核表達系統(tǒng)之一,廣泛應用于蛋白功能研究,抗原及疫苗制備。我們利用桿狀病毒表達系統(tǒng)構建了幾種危害人類健康的病毒VLPs,并初步探究了其作為候選疫苗的免疫原性。寨卡病毒（Zika virus,ZIKV）是蚊傳黃病毒,近年發(fā)現(xiàn)其感染與新生兒小頭畸形有關,且能引起格林-巴利綜合征等神經(jīng)系統(tǒng)疾病。目前,對于ZIKV引起的疾病,尚無有效的疫苗和特異性治療藥物,ZIKV嚴重危害人類健康。我們利用桿狀病毒表達系統(tǒng),構建了表達ZIKV pr ME蛋白的重組病毒。經(jīng)蔗糖密度梯度離心,從感染的昆蟲細胞中純化得到由ZIKV pr M蛋白和E蛋白自組裝形成的ZIKV VLPs。以ZIKV pr ME VLPs免疫小鼠能夠誘導小鼠產(chǎn)生中和抗體,及ZIKV特異的體液和細胞免疫反應,表現(xiàn)出良好的免疫原性,為... 

【文章來源】：中國科學院大學(中國科學院武漢病毒研究所)湖北省

【文章頁數(shù)】：206 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

膜蛋白Gn截短表達示意圖

圖6.5膜蛋白Gn截短表達示意圖Gn單抗識別表位的第二輪鑒定,我們將GnⅠ(1-47)和GnⅡ(38-97)進一步分為Gn(1-17),Gn(8-27),Gn(18-37),Gn(28-47),Gn(38-57),Gn(48-67),Gn(58-77),Gn(68-87)和Gn(78-97)進行截短原核表達,其截短示意圖如圖6.5所示。29G7和30B7單克隆融合上清與Gn(18-37)和Gn(28-47)融合蛋白有特異性的反應,初步判斷識別的表位在18-47 aa范圍內(nèi),去掉重疊區(qū)域,識別表位在28-37 aa,氨基酸序列為GGPGEKITIC。27F2,27F8,27F10,27G3,28C4和28F3單克隆雜交瘤細胞上清與Gn(58-77)和Gn(68-87)融合蛋白有特異性的反應,初步判斷識別的表位在58-87 aa范圍內(nèi),去掉重疊區(qū)域,識別表位68-77 aa,氨基酸序列為SASGKSCEID。檢測單克隆抗體的亞型分型,結果表明兩株Gn mAb的亞型均為IgG1。

Gn單抗識別表位的第二輪鑒定,我們將GnⅠ(1-47)和GnⅡ(38-97)進一步分為Gn(1-17),Gn(8-27),Gn(18-37),Gn(28-47),Gn(38-57),Gn(48-67),Gn(58-77),Gn(68-87)和Gn(78-97)進行截短原核表達,其截短示意圖如圖6.5所示。29G7和30B7單克隆融合上清與Gn(18-37)和Gn(28-47)融合蛋白有特異性的反應,初步判斷識別的表位在18-47 aa范圍內(nèi),去掉重疊區(qū)域,識別表位在28-37 aa,氨基酸序列為GGPGEKITIC。27F2,27F8,27F10,27G3,28C4和28F3單克隆雜交瘤細胞上清與Gn(58-77)和Gn(68-87)融合蛋白有特異性的反應,初步判斷識別的表位在58-87 aa范圍內(nèi),去掉重疊區(qū)域,識別表位68-77 aa,氨基酸序列為SASGKSCEID。檢測單克隆抗體的亞型分型,結果表明兩株Gn mAb的亞型均為IgG1。圖6.8 Gc單克隆抗體識別線性表位的鑒定


本文編號：3513067