表觀遺傳是不涉及DNA序列變化的可遺傳變化,包括DNA甲基化、組蛋白修飾和miRNA調(diào)控等。在組蛋白甲基化修飾中,主要是組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶（histone lysine methyltransferase,HKMT）參與調(diào)控。有文獻(xiàn)報(bào)道,HKMT蛋白的催化核心為SET結(jié)構(gòu)域,它具有促進(jìn)或抑制基因表達(dá)的作用。在里氏木霉（Trichoderma reesei）中,HKMT對(duì)纖維素酶基因的表達(dá)調(diào)控的機(jī)制尚不明確。本文闡述了以里氏木霉為研究對(duì)象,利用Split-Maker技術(shù)構(gòu)建了組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶基因敲除表達(dá)盒,并轉(zhuǎn)化了里氏木霉T.reesei QM9414。經(jīng)PCR及Southern印跡驗(yàn)證正確后,顯微鏡觀察到T.reeseiΔhkmt菌株菌絲較長(zhǎng),分支較多。檢測(cè)到突變體菌株連續(xù)7d濾紙酶活（filter paper enzyme activity,AFP）和羧甲基纖維素鈉酶活（carboxymethyl cellulose sodium enzyme activity,CMCA）。結(jié)果分別比野生型菌株高出5.00 IU·mL^-1、15.00 IU·mL

【文章來源】：中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2020,36(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株與質(zhì)粒
        1.1.2 培養(yǎng)基
        1.1.3 主要試劑和儀器
    1.2 方法
        1.2.1 組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(hkmt)基因干擾片段的設(shè)計(jì)與合成
        1.2.2 敲除表達(dá)盒的構(gòu)建
        1.2.3 T.reesei QM9414原生質(zhì)體的轉(zhuǎn)化
        1.2.4 基因組DNA提取及突變體T.reesei Δhkmt轉(zhuǎn)化子的PCR驗(yàn)證
        1.2.5 Southern印跡驗(yàn)證突變體
        1.2.6 RNA提取
        1.2.7 RNA反轉(zhuǎn)錄和熒光定量PCR
        1.2.8 酶活測(cè)定
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶基因敲除盒的構(gòu)建
    2.2 突變體T.reesei Δhkmt 的PCR鑒定
    2.3 突變體T. reesei Δhkmt轉(zhuǎn)化子的Southern 印跡驗(yàn)證
    2.4 T. reesei QM9414和T. reesei Δhkmt菌株表型差異分析
    2.5 敲除賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶的突變體中FPA和CMCA的酶活性明顯提高
    2.6 敲除賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶的突變體中cbh1、egl1和xyr1,轉(zhuǎn)錄水平明顯增強(qiáng)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]多靶向沉默里氏木霉碳代謝阻遏物對(duì)纖維素酶活性和表達(dá)的調(diào)控研究[J]. 鄧嘉雯,高云雨,劉旭坤,張珂珂,鐘路遙,田生禮.  微生物學(xué)報(bào). 2019(04)
[2]里氏木霉組成型表達(dá)siRNA干擾cre1基因?qū)w維素酶表達(dá)的調(diào)控作用[J]. 高云雨,鐘路遙,董冠園,佘偉怡,周嬌嬌,劉思遠(yuǎn),田生禮.  微生物學(xué)雜志. 2018(01)
[3]5-氮雜-2-脫氧胞苷對(duì)里氏木霉產(chǎn)纖維素酶的影響[J]. 周嬌嬌,佘煒怡,王浩入,謝寧,田生禮.  深圳大學(xué)學(xué)報(bào)(理工版). 2017(02)



本文編號(hào)：3508374