發(fā)布時(shí)間：2021-11-20 16:50

　　目的:本研究旨在探討lncRNA DANCR促進(jìn)滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化的機(jī)制,以期為滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨組織分化和增殖提供理論基礎(chǔ)。方法:（1）術(shù)中收集患者的關(guān)節(jié)液標(biāo)本,提取患者關(guān)節(jié)液中的SMSCs,在體外培養(yǎng)擴(kuò)增、純化、誘導(dǎo)并對(duì)其進(jìn)行鑒定。（2）敲低和過表達(dá)SMSCs中的lncRNA DANCR,同時(shí)設(shè)立空白對(duì)照組,通過CCK-8實(shí)驗(yàn)、Sox9、Col II在mRNA和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)情況等來檢測SMSCs的增殖和軟骨細(xì)胞分化能力。（3）通過生信預(yù)測分析、雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)、RIP等確定lncRNA DANCR的靶基因是否為miR-1275;過表達(dá)lncRNA DANCR的同時(shí)敲低miR-1275以及敲低lncRNA DANCR的同時(shí)過表達(dá)miR-1275以再次佐證。（4）Taget Scan生信預(yù)測分析、雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)確定MMP-13mRNA是否為miR-1275的靶基因;敲低和過表達(dá)miR-1275,以再次佐證。（5）敲低和過表達(dá)lncRNA DANCR后檢測MMP-13在mRNA和蛋白質(zhì)上水平;過表達(dá)lncRNA DANCR的同時(shí)... 

【文章來源】：南京大學(xué)江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞(SMSCs)的鑒定

DANCR對(duì)SMSCs增殖的影響

南京大學(xué)碩士學(xué)位論文14促進(jìn)SMSCs軟骨形成。圖3DANCR對(duì)SMSCs軟骨分化的影響。(A,B)Westernblot分析DANCR對(duì)Sox9和ColII蛋白表達(dá)的影響。(C)通過qRT-PCR分析了DANCR對(duì)Sox9和ColIImRNA表達(dá)的影響。(D)對(duì)照組、敲低組和過表達(dá)組中sGAG含量。*p<0.054.DANCR直接與miR-1275相互作用為了探討miRNAs是否參與了DANCR促進(jìn)SMSCs增殖和軟骨分化，我們使用了miRcode來識(shí)別與DANCR相互作用的miRNA。圖4A顯示，miR-1275在3’-UTR處通過堿基互補(bǔ)配對(duì)與DANCR結(jié)合。QRT-PCR結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染sh-DANCR質(zhì)粒的SMSCs中，miR-1275表達(dá)增加，而轉(zhuǎn)染DANCR質(zhì)粒的SMSCs中，miR-1275表達(dá)減少(圖4B)。RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀檢測結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，anti-Ago2在很大程度上捕獲了DANCR和miR-1275,提示了DANCR和miR-1275的結(jié)合(圖4C)。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)顯示，miR-1275模擬物顯著降低了DANCR-WT組的熒光素酶活性(圖4D)。


本文編號(hào)：3507750