目的:本研究旨在探討lncRNA DANCR促進滑膜間充質(zhì)干細胞增殖和誘導(dǎo)滑膜間充質(zhì)干細胞向軟骨細胞分化的機制,以期為滑膜間充質(zhì)干細胞向軟骨組織分化和增殖提供理論基礎(chǔ)。方法:（1）術(shù)中收集患者的關(guān)節(jié)液標本,提取患者關(guān)節(jié)液中的SMSCs,在體外培養(yǎng)擴增、純化、誘導(dǎo)并對其進行鑒定。（2）敲低和過表達SMSCs中的lncRNA DANCR,同時設(shè)立空白對照組,通過CCK-8實驗、Sox9、Col II在mRNA和蛋白質(zhì)水平的表達情況等來檢測SMSCs的增殖和軟骨細胞分化能力。（3）通過生信預(yù)測分析、雙熒光素酶報告基因?qū)嶒�、RIP等確定lncRNA DANCR的靶基因是否為miR-1275;過表達lncRNA DANCR的同時敲低miR-1275以及敲低lncRNA DANCR的同時過表達miR-1275以再次佐證。（4）Taget Scan生信預(yù)測分析、雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灤_定MMP-13mRNA是否為miR-1275的靶基因;敲低和過表達miR-1275,以再次佐證。（5）敲低和過表達lncRNA DANCR后檢測MMP-13在mRNA和蛋白質(zhì)上水平;過表達lncRNA DANCR的同時... 

【文章來源】：南京大學(xué)江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

滑膜間充質(zhì)干細胞(SMSCs)的鑒定

DANCR對SMSCs增殖的影響

南京大學(xué)碩士學(xué)位論文14促進SMSCs軟骨形成。圖3DANCR對SMSCs軟骨分化的影響。(A,B)Westernblot分析DANCR對Sox9和ColII蛋白表達的影響。(C)通過qRT-PCR分析了DANCR對Sox9和ColIImRNA表達的影響。(D)對照組、敲低組和過表達組中sGAG含量。*p<0.054.DANCR直接與miR-1275相互作用為了探討miRNAs是否參與了DANCR促進SMSCs增殖和軟骨分化，我們使用了miRcode來識別與DANCR相互作用的miRNA。圖4A顯示，miR-1275在3’-UTR處通過堿基互補配對與DANCR結(jié)合。QRT-PCR結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染sh-DANCR質(zhì)粒的SMSCs中，miR-1275表達增加，而轉(zhuǎn)染DANCR質(zhì)粒的SMSCs中，miR-1275表達減少(圖4B)。RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀檢測結(jié)果顯示，與對照組相比，anti-Ago2在很大程度上捕獲了DANCR和miR-1275,提示了DANCR和miR-1275的結(jié)合(圖4C)。雙熒光素酶報告基因?qū)嶒烇@示，miR-1275模擬物顯著降低了DANCR-WT組的熒光素酶活性(圖4D)。


本文編號：3507750