小反芻獸疫（Peste des Petits Ruminants,PPR）是由小反芻獸疫病毒（Peste des Petits Ruminants virus,PPRV）引起山羊、綿羊等小反芻動物的一種急性、烈性和高度接觸性傳染病。PPRV具有較強的淋巴細(xì)胞嗜性,感染宿主后造成機體免疫抑制是PPRV的主要致病特征。白介素1受體相關(guān)激酶1（interleukin-1 receptor-associated kinase1,IRAK1）是TLR信號通路及干擾素信號通路中的關(guān)鍵分子,參與機體抗病毒反應(yīng)。Micro RNA是一類僅有18²5個核苷酸的單鏈小分子RNA,在宿主抗病毒反應(yīng)中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。目前,PPRV感染引起機體免疫抑制過程中miRNA起何作用尚不清楚。本研究中,利用PPRV感染山羊外周血單個核細(xì)胞（PBMCs）后,根據(jù)miRNA高通量測序結(jié)果,從中篩選出與Ⅰ型干擾素通路密切相關(guān)的miR-3,進一步探究miR-3在PPRV感染引起機體免疫抑制中的作用及其機制,本研究內(nèi)容和結(jié)果如下:1.檢測PPRV不同感染劑量（MOI=0.1、1、10）和不同感染時間對山... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

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小反芻獸疫病毒基因組(Muniretal.2012)

西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文6負(fù)調(diào)控子(Zhangetal.2015;Heetal.2004)。迄今，人類已經(jīng)確定了28000多種前體miRNA和38000多種成熟的miRNA序列，這些序列可調(diào)節(jié)超過三分之二的編碼功能蛋白的基因(非成瑞等2018)。在過去的十年中，研究表明：miRNA可以參與廣泛的生物學(xué)過程，包括分化、免疫反應(yīng)、增殖、血管生成、生長、代謝和細(xì)胞凋亡等(Fathullahzadehetal.2016;Mirzaeietal.2017;Mirzaeietal.2016;Mohammadietal.2016)。1.3.1microRNA的生物合成及作用機理成熟miRNA的形成的生物過程如下：首先，miRNA由RNA聚合酶II從蛋白質(zhì)編碼/非編碼基因的內(nèi)含子或作為細(xì)胞核中的獨立基因進行轉(zhuǎn)錄，以產(chǎn)生具有一個或多個發(fā)夾結(jié)構(gòu)的miRNA初始分子（Pri-miRNA）(Daugaardetal.2017)。隨后，這些Pri-miRNA經(jīng)過加帽、聚腺苷酸化后，在細(xì)胞核中被RNA聚合酶Ⅲ（Drosha）和迪喬治綜合征關(guān)鍵區(qū)域基因8（DCGR8）組成的復(fù)合體切割，以產(chǎn)生具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的miRNA前體（pre-miRNA）(Gregoryetal.2004)。最終，pre-miRNA在核輸出蛋白Exportin-5的作用下轉(zhuǎn)運到細(xì)胞質(zhì)中，在這里被RNA聚合酶Ⅲ（Dicer）識別且進一步加工為長度約18~25個核苷酸的雙鏈miRNA分子(Parketal.2011)。解離的雙鏈體產(chǎn)生成熟的單鏈miRNA分子并入Argonaute蛋白質(zhì)，形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物（RISC）以調(diào)節(jié)基因表達，“乘客”miRNA鏈通常被降解(Bartel2009;趙爽等2009)。RISC復(fù)合體與靶標(biāo)mRNA的3"UTR通過完全或不完全堿基配對調(diào)節(jié)基因表達，從而誘導(dǎo)靶標(biāo)mRNA降解或抑制翻譯。主要的生物過程如圖1-2所示。圖1-2microRNA的形成及作用功能(Momen-Heravietal.2018)Figure1-2microRNAbiogenesisandfunction

第三章miR-3調(diào)控IFN-α表達的作用機制29圖3-6PPRV感染激活miR-3及其在調(diào)節(jié)IFN-α.中的作用機制Figure3-6.theactivationofmiR-3expressionuponPPRVinfectionandtheroleofmiR-3intheregulationoftheantiviralactivityofIFN-α.3.4討論宿主先天性免疫反應(yīng)是針對病毒免疫防御的重要防線，它能夠?qū)Σ《緩?fù)制起到抑制作用。許多病毒已經(jīng)進化出多種方式逃避宿主的先天免疫和特異性免疫反應(yīng)。例如：HCV通過多種方式影響病毒與宿主相互作用以逃避宿主免疫反應(yīng)，這種相互作用會破壞細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)途徑并削弱宿主細(xì)胞IFN的抗病毒作用(Dattaetal.2011;Mukherjeeetal.2015;Yangetal.2014)。miRNA能夠靶向多種基因mRNA以調(diào)節(jié)基因表達，單個miRNA可以直接或間接地調(diào)節(jié)多個基因的表達水平(Selbachetal.2008)。研究已證實多種miRNA可以通過靶向Ⅰ型IFN通路的關(guān)鍵分子，拮抗宿主抗病毒反應(yīng)。在本章研究，我們證明了宿主細(xì)胞miR-3通過直接靶向IRAK1（Ⅰ型IFN信號傳導(dǎo)的關(guān)鍵分子）抑制IFN-α的產(chǎn)生并且顯著促進PPRV復(fù)制水平。先前已有研究表明：多種病毒通過拮抗IRAK1以促進其感染，例如：HCV感染誘導(dǎo)的miR-21通過靶向MyD88和IRAK1負(fù)調(diào)控Ⅰ型IFN產(chǎn)生，從而實現(xiàn)免疫逃逸(Chenetal.2013)；PRRSVnsp11與IRAK1共定位于細(xì)胞質(zhì)中，沉默IRAK1基因表達可抑制IFN-β產(chǎn)生從而促進PRRSV復(fù)制，過表達IRAK1蛋白則可抑制PRRSV復(fù)制(靳換，2017)；PEDV感染豬小腸上皮細(xì)胞下

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本文編號：3491198