查爾酮異構(gòu)酶（CHI）是植物黃酮合成途徑的關(guān)鍵酶,為了研究鮮切荸薺貯藏過(guò)程中表面黃化的機(jī)理,利用RACE技術(shù)對(duì)荸薺CHI基因編碼區(qū)cDNA全長(zhǎng)進(jìn)行克隆,并分析其在不同組織和鮮切荸薺貯藏過(guò)程中的表達(dá)。結(jié)果表明,荸薺CHI基因（CwCHI）cDNA序列長(zhǎng)度為1 003 bp（GeneBank:MG719238）,含有一個(gè)744 bp的最大開(kāi)放閱讀框,其DNA包含3個(gè)內(nèi)含子和4個(gè)外顯子。Cw CHI可編碼247個(gè)氨基酸,經(jīng)預(yù)測(cè)其分子量為26.410 kD,理論等電點(diǎn)為4.89。Cw CHI蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)以α-螺旋為主,占38.06%。通過(guò)多重比對(duì)發(fā)現(xiàn),CwCHI具有該家族特有的保守結(jié)構(gòu)域,決定底物偏好性的第201位氨基酸為Ser,與其他Ⅰ型CHI蛋白相同。系統(tǒng)進(jìn)化分析表明CwCHI與油棕櫚和菠蘿的CHI蛋白親緣關(guān)系較近。熒光定量PCR分析表明,CwCHI基因在荸薺皮中的表達(dá)量最高,而在荸薺肉中的表達(dá)最低。鮮切荸薺黃化過(guò)程中CHI活性和CwCHI表達(dá)量快速上升,水楊酸處理抑制了CHI活性的上升和CwCHI的表達(dá)。 

【文章來(lái)源】：保鮮與加工. 2020,20(04)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與設(shè)備
        1.1.1 材料與試劑
        1.1.2 儀器與設(shè)備
    1.2 方法
        1.2.1 總RNA提取
        1.2.2 基因克隆
        1.2.3 基因生物信息學(xué)分析
        1.2.4 酶活性測(cè)定
        1.2.5 基因表達(dá)分析
        1.2.6 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果與分析
    2.1 荸薺CHI基因的克隆
    2.2 CwCHI生物信息學(xué)分析
    2.3 Cw CHI基因在荸薺不同組織中的表達(dá)分析
    2.4 鮮切荸薺黃化過(guò)程中CHI活性變化及CwCHI的表達(dá)分析
3 討論與結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]乙醇處理對(duì)鮮切荸薺黃化及相關(guān)酶的影響[J]. 姜悅,何鳳平,鐘慧玲,王藜穎,潘永貴.  食品工業(yè)科技. 2017(10)
[2]桂花查爾酮異構(gòu)酶OfCHI基因的克隆與表達(dá)分析[J]. 張水明,涂佳麗,阿不都熱扎克·依沙克,李川微,戶倩,陳磊,董麗麗.  西北植物學(xué)報(bào). 2016(09)
[3]芍藥查爾酮異構(gòu)酶基因（CHI）克隆、密碼子偏好性分析以及蛋白結(jié)構(gòu)功能預(yù)測(cè)[J]. 吳彥慶,趙大球,王靜,陶俊.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2016(02)
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[5]巨峰葡萄查爾酮異構(gòu)酶基因克隆及表達(dá)分析[J]. 周軍,姚泉洪,彭日荷,熊愛(ài)生,蔡斌,徐錦濤,金曉芬,陶建敏,章鎮(zhèn).  西北植物學(xué)報(bào). 2009(09)
[6]植物查耳酮異構(gòu)酶生物信息學(xué)分析[J]. 陳克克,武雪.  生物信息學(xué). 2009(03)

碩士論文
[1]柚果實(shí)黃酮合成相關(guān)基因cDNA克隆及生物信息學(xué)分析[D]. 任永康.福建農(nóng)林大學(xué) 2010



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