通過構(gòu)建重組表達(dá)載體pEGFP-VP3,將pEGFP-VP3轉(zhuǎn)染MA104細(xì)胞,觀察VP3的表達(dá)情況和表達(dá)的VP3對(duì)輪狀病毒復(fù)制的作用,進(jìn)一步評(píng)價(jià)構(gòu)建方式是否成功。GFP熒光和Western Blot結(jié)果顯示,pEGFP-VP3轉(zhuǎn)染MA104細(xì)胞48 h,重組蛋白VP3表達(dá)量最高。通過RV拷貝數(shù)和免疫熒光檢測病毒的復(fù)制情況,結(jié)果均顯示重組蛋白VP3可促進(jìn)病毒復(fù)制,為后續(xù)更加深入地探究VP3的功能及在輪狀病毒復(fù)制中的作用提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 

【文章來源】：生物學(xué)雜志. 2020,37(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定電泳結(jié)果

圖1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定電泳結(jié)果重組質(zhì)粒pEGFP-N2-VP3 轉(zhuǎn)染MA104 細(xì)胞后,分別于不同時(shí)段取出細(xì)胞,用倒置熒光顯微鏡觀察GFP熒光在細(xì)胞內(nèi)的分布及表達(dá)情況。結(jié)果顯示, MA104細(xì)胞的胞質(zhì)和胞核中均有pEGFP-N2-VP3分布。pEGFP-N2-VP3表達(dá)量初期隨轉(zhuǎn)染時(shí)間逐步增高,且在48 h達(dá)到高峰,隨后表達(dá)下降(圖3)。

重組質(zhì)粒pEGFP-N2-VP3 轉(zhuǎn)染MA104 細(xì)胞后,分別于不同時(shí)段取出細(xì)胞,用倒置熒光顯微鏡觀察GFP熒光在細(xì)胞內(nèi)的分布及表達(dá)情況。結(jié)果顯示, MA104細(xì)胞的胞質(zhì)和胞核中均有pEGFP-N2-VP3分布。pEGFP-N2-VP3表達(dá)量初期隨轉(zhuǎn)染時(shí)間逐步增高,且在48 h達(dá)到高峰,隨后表達(dá)下降(圖3)。2.2 轉(zhuǎn)染pEGPF-N2-VP3對(duì)RV復(fù)制的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]輪狀病毒結(jié)構(gòu)蛋白的研究進(jìn)展[J]. 湯璘珊,陳蘭舉.  醫(yī)學(xué)綜述. 2013(01)



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