利用條件性基因敲除方法和免疫熒光技術(shù),檢測(cè)和分析了小鼠從胚胎到成體耳蝸柯蒂氏器中Gata3的表達(dá).結(jié)果表明,Gfi1-cre可以高效敲除特定時(shí)期毛細(xì)胞內(nèi)Gata3基因的表達(dá).同時(shí)發(fā)現(xiàn)成體Gata3-Null的毛細(xì)胞數(shù)量減少且排列發(fā)生紊亂.提示轉(zhuǎn)錄因子GATA3在耳蝸毛細(xì)胞發(fā)育和結(jié)構(gòu)維持中起著重要作用. 

【文章來(lái)源】：杭州師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2020,19(05)

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Gata3-CKO小鼠基因結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)圖和雜交遺傳圖及小鼠基因鑒定結(jié)果

Gata3在小鼠內(nèi)耳的發(fā)育過程中持續(xù)表達(dá).本研究利用抗Gata3免疫組化方法,觀察到Gata3在E9.5時(shí)開始在整個(gè)聽囊(otocyst)表達(dá).表達(dá)出截?cái)嗟腉ATA3蛋白質(zhì),由于缺乏進(jìn)入細(xì)胞核的引導(dǎo)序列,從而只能停留在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)[20-22].本研究中使用的GATA3抗體可以識(shí)別截?cái)嗟腉ATA3. E11.5到E12.5 Gata3的表達(dá)局限于聽囊的背側(cè)和中腹部.E15.5到出生后,OC發(fā)育基本成型(圖 2F),期間可見支持細(xì)胞和毛細(xì)胞內(nèi)持續(xù)表達(dá)Gata3(圖 2A-E).MYO7A在毛細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá),一般被用作毛細(xì)胞的Marker.在鑒定Gfi1-cre驅(qū)動(dòng)的CKO Gata3-Null小鼠的敲除效率時(shí),本研究發(fā)現(xiàn)從E15.5開始到P5,Gata3-Null小鼠的毛細(xì)胞核內(nèi)不再表達(dá)GATA3,而同期野生型對(duì)照的毛細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)明顯(圖 2G-2K).此期未見OC的結(jié)構(gòu)異常,但發(fā)現(xiàn)突變體與野生型對(duì)照相比較,緊鄰毛細(xì)胞下的支持細(xì)胞核內(nèi)的Gata3表達(dá)有降低現(xiàn)象.提示Gata3在毛細(xì)胞的表達(dá)水平與支持細(xì)胞的表達(dá)水平之間存在某種聯(lián)系.2.3 條件性敲除Gata3后對(duì)耳蝸其他細(xì)胞和結(jié)構(gòu)的影響

已有多項(xiàng)研究確認(rèn)內(nèi)耳的發(fā)育受眾多基因的調(diào)控,其中有很多重要的轉(zhuǎn)錄因子[3, 23-28].Sox2 (編碼Sry-related HMG box transcription factor)基因隸屬于Sox轉(zhuǎn)錄因子家族,是耳蝸毛細(xì)胞(聽覺受體細(xì)胞)發(fā)育的關(guān)鍵基因,對(duì)毛細(xì)胞祖細(xì)胞的增殖有重要影響[29].Sox2在毛細(xì)胞和支持細(xì)胞中的表達(dá)不一致,提示OC細(xì)胞分化和結(jié)構(gòu)形成過程中Sox2受其他因素的影響.本研究發(fā)現(xiàn),在E15.5敲除Gata3后(圖2H-H″),P0前Gata3-Null小鼠Sox2的表達(dá)模式與野生型無(wú)明顯差異.雖然E18.5時(shí)野生型小鼠毛細(xì)胞已經(jīng)停止表達(dá)Sox2(圖 3A-A″;a-a″);但在P0時(shí)Gata3-Null小鼠內(nèi)毛細(xì)胞內(nèi)持續(xù)表達(dá)Sox2(圖 3B-B″;b-b″).提示Gata3基因在決定毛細(xì)胞命運(yùn)和維持其結(jié)構(gòu)和功能方面有比較廣泛和關(guān)鍵的影響.圖4 Gata3缺失對(duì)成體耳蝸毛細(xì)胞數(shù)量和排列的影響


本文編號(hào)：3469512