利用條件性基因敲除方法和免疫熒光技術(shù),檢測和分析了小鼠從胚胎到成體耳蝸柯蒂氏器中Gata3的表達.結(jié)果表明,Gfi1-cre可以高效敲除特定時期毛細胞內(nèi)Gata3基因的表達.同時發(fā)現(xiàn)成體Gata3-Null的毛細胞數(shù)量減少且排列發(fā)生紊亂.提示轉(zhuǎn)錄因子GATA3在耳蝸毛細胞發(fā)育和結(jié)構(gòu)維持中起著重要作用. 

【文章來源】：杭州師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2020,19(05)

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

Gata3-CKO小鼠基因結(jié)構(gòu)簡圖和雜交遺傳圖及小鼠基因鑒定結(jié)果

Gata3在小鼠內(nèi)耳的發(fā)育過程中持續(xù)表達.本研究利用抗Gata3免疫組化方法,觀察到Gata3在E9.5時開始在整個聽囊(otocyst)表達.表達出截斷的GATA3蛋白質(zhì),由于缺乏進入細胞核的引導(dǎo)序列,從而只能停留在細胞質(zhì)內(nèi)[20-22].本研究中使用的GATA3抗體可以識別截斷的GATA3. E11.5到E12.5 Gata3的表達局限于聽囊的背側(cè)和中腹部.E15.5到出生后,OC發(fā)育基本成型(圖 2F),期間可見支持細胞和毛細胞內(nèi)持續(xù)表達Gata3(圖 2A-E).MYO7A在毛細胞的細胞質(zhì)內(nèi)表達,一般被用作毛細胞的Marker.在鑒定Gfi1-cre驅(qū)動的CKO Gata3-Null小鼠的敲除效率時,本研究發(fā)現(xiàn)從E15.5開始到P5,Gata3-Null小鼠的毛細胞核內(nèi)不再表達GATA3,而同期野生型對照的毛細胞核內(nèi)表達明顯(圖 2G-2K).此期未見OC的結(jié)構(gòu)異常,但發(fā)現(xiàn)突變體與野生型對照相比較,緊鄰毛細胞下的支持細胞核內(nèi)的Gata3表達有降低現(xiàn)象.提示Gata3在毛細胞的表達水平與支持細胞的表達水平之間存在某種聯(lián)系.2.3 條件性敲除Gata3后對耳蝸其他細胞和結(jié)構(gòu)的影響

已有多項研究確認內(nèi)耳的發(fā)育受眾多基因的調(diào)控,其中有很多重要的轉(zhuǎn)錄因子[3, 23-28].Sox2 (編碼Sry-related HMG box transcription factor)基因隸屬于Sox轉(zhuǎn)錄因子家族,是耳蝸毛細胞(聽覺受體細胞)發(fā)育的關(guān)鍵基因,對毛細胞祖細胞的增殖有重要影響[29].Sox2在毛細胞和支持細胞中的表達不一致,提示OC細胞分化和結(jié)構(gòu)形成過程中Sox2受其他因素的影響.本研究發(fā)現(xiàn),在E15.5敲除Gata3后(圖2H-H″),P0前Gata3-Null小鼠Sox2的表達模式與野生型無明顯差異.雖然E18.5時野生型小鼠毛細胞已經(jīng)停止表達Sox2(圖 3A-A″;a-a″);但在P0時Gata3-Null小鼠內(nèi)毛細胞內(nèi)持續(xù)表達Sox2(圖 3B-B″;b-b″).提示Gata3基因在決定毛細胞命運和維持其結(jié)構(gòu)和功能方面有比較廣泛和關(guān)鍵的影響.圖4 Gata3缺失對成體耳蝸毛細胞數(shù)量和排列的影響


本文編號：3469512