【目的】克隆白屈菜CmTLP基因并進行植物表達載體構(gòu)建,為進一步研究CmTLP基因的功能及探索耐寒抗寒藥用植物分子育種奠定基礎(chǔ)�！痉椒ā炕诎浊宿D(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),分析得到白屈菜TLP基因開放閱讀框,以18S RNA為內(nèi)參基因,采用qRT-PCR法檢測CmTLP基因在不同溫度（20（CK）,10,0,-7,-20℃）下白屈菜植株中的相對表達量。用RT-PCR法克隆該基因并構(gòu)建植物表達載體,電擊法轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌�！窘Y(jié)果】qRT-PCR結(jié)果表明,CmTLP基因在-7℃、12 h時,相對表達量最高;-7℃、24 h時,相對表達量最低�？寺“浊薚LP基因,命名為CmTLP。該基因開放閱讀框長度為696 bp,編碼由231個氨基酸組成的肽鏈;分子質(zhì)量為24.66 ku,為酸性蛋白。系統(tǒng)發(fā)育樹表明,CmTLP基因與博落回、月季、胡桃的氨基酸序列有較高的同源性。構(gòu)建了植物表達載體pRI201-AN-CmTLP,并成功轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌。【結(jié)論】克隆了白屈菜CmTLP基因,構(gòu)建植物表達載體pRI201-AN-CmTLP,并成功轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌。 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2020,48(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

不同低溫脅迫處理白屈菜CmTLP基因的相對表達量

將純化的PCR產(chǎn)物與pMD19-T連接,從篩選出的陽性克隆培養(yǎng)物中提取質(zhì)粒DNA,pMD19-T-CmTLP經(jīng)Nde Ⅰ和Sac Ⅰ雙酶切,在電泳圖上可見2 600 bp和700 bp附近有條帶,與載體pMD19-T和TLP片段大小一致,表明亞克隆載體構(gòu)建完成(圖2-b)。2.3 白屈菜CmTLP基因的生物信息學(xué)分析

用ProtParam預(yù)測TLP基因編碼的蛋白質(zhì)分子式為C1 081H1 631N295O333S18,分子質(zhì)量為24.66 ku;等電點(pI)為4.80,是酸性蛋白;不穩(wěn)定系數(shù)(Ⅱ)為26.74,屬于穩(wěn)定蛋白(不穩(wěn)定指數(shù)>40為不穩(wěn)定蛋白);平均親水指數(shù)為-0.137,為親水性蛋白。正電荷氨基酸殘基(Arg+Lys)為14個,占6.06%;負(fù)電荷氨基酸殘基(Asp+Glu)為18個,占7.79%;其開放閱讀框長696 bp,可編碼231個氨基酸(圖3)。2.3.2 系統(tǒng)發(fā)育樹

【參考文獻】：
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本文編號：3458093