發(fā)布時(shí)間：2021-10-23 16:27

　　空腸彎曲桿菌（Campylobacter jejuni）作為人畜共患病原菌,是感染性腹瀉的主要病原菌之一。目前用于臨床治療C.jejuni感染的常用藥物為抗生素,長期使用會帶來藥物在體內(nèi)的殘留并誘發(fā)耐藥性。已有大量研究報(bào)道采用益生菌做為防治C.jejuni感染的手段。本文基于不同種屬的乳酸菌,首先考察了其在小鼠感染模型以及肉雞攜帶模型中對C.jejuni的拮抗作用,分析對比了乳酸菌在這兩種模型中拮抗作用的差異;其次分析了在兩種不同模型中因乳酸菌的干預(yù)或治療帶來的腸道菌群的變化,考察了腸道菌群的改變與宿主拮抗致病菌的關(guān)聯(lián)性;此外,通過構(gòu)建秀麗隱桿線蟲模型,考察在了乳酸菌在不受復(fù)雜腸道菌群的影響下,在宿主體內(nèi)減少C.jejuni定植并緩解其感染的作用機(jī)制;最后將乳酸菌生長特性與其拮抗C.jejuni感染作用進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)合基因組比對分析,確定乳酸菌自身成膜性與細(xì)胞粘附性直接影響了其對C.jejuni的拮抗作用。本文主要研究結(jié)果如下:1.構(gòu)建了弓形蟲與C.jejuni復(fù)合感染的小鼠模型以消除正常小鼠對病原菌的定植阻力,通過乳酸菌對小鼠的干預(yù),對小鼠糞便中C.jejuni定植量、糞便隱血、... 

【文章來源】：江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

動物實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)

第二章乳酸菌在小鼠及肉雞模型體內(nèi)對C.jejuni的拮抗作用17克服。弓形蟲感染小鼠后，幾天內(nèi)，小鼠便患有急性回腸炎，使得C.jejuni更易在小鼠腸道中定植�？紤]到弓形蟲對小鼠的致死率，在實(shí)驗(yàn)的第7天和第9天檢測C.jejuni在腸道中的定植量。隨著弓形蟲感染持續(xù)時(shí)間的延長，如圖2-2A所示，在第7天時(shí)，C.jejuni的定植量達(dá)到106CFU/g。不僅如此，隨著感染的加劇，模型組在第9天時(shí)比第7天檢測到更多的C.jejuni，其活菌數(shù)可以達(dá)到109CFU/g（圖2-2B）。LAB菌株2009、L103、13M2和N8對C.jejuni在小鼠腸道中的定植產(chǎn)生了顯著的抑制作用，糞便中C.jejuni的定植量降至低于105CFU/g（第7天）和106CFU/g（第9天），且與模型組相比具有顯著差異（P<0.05）。而其他組別，例如X13和9-5，在第7、9天時(shí)，在抑制C.jejuni定植方面幾乎起不到任何作用，其病原菌仍維持在原數(shù)量級（P>0.05）。圖2-2小鼠糞便C.jejuni活菌數(shù)Fig.2-2NumberofviablecellsinC.jejunifecessamplesofmice普通小鼠由于其穩(wěn)定的腸道微生物結(jié)構(gòu)阻礙了空腸彎曲桿菌在宿主體內(nèi)的定植，從而無法使小鼠具有臨床上的患病特征。與我們實(shí)驗(yàn)結(jié)果相類似的是，Wagner等人在對免疫缺陷性小鼠進(jìn)行的模擬實(shí)驗(yàn)中，他們發(fā)現(xiàn)雙歧桿菌和乳桿菌可以增加對空腸彎曲桿菌的定植抗性[133]。也有研究者報(bào)道，當(dāng)嗜酸乳桿菌在免疫缺陷小鼠中定植并富集時(shí)，它可以與腸道位點(diǎn)優(yōu)先結(jié)合以形成針對C.jejuni的占位，以減少C.jejuni在小鼠腸道中的定植，達(dá)到減輕C.jejuni在體內(nèi)感染的目的[134]。在本文研究中，使用了3周齡的雌性C57BL/6小鼠，據(jù)報(bào)道其對C.jejuni有易感性[135]。同時(shí)我們參考并改良了弓形蟲感染模型[136-137]，該模型使宿主更容易受到C.jejuni感染，以評估乳酸菌對C.jejuni感染

江南大學(xué)博士學(xué)位論文18的影響。通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，具有明顯拮抗作用的乳桿菌確實(shí)可以減少C.jejuni和弓形蟲共感染小鼠體內(nèi)C.jejuni的定植，從而減輕C.jejuni的感染。2.4.2乳酸菌對感染小鼠糞便隱血的影響研究對感染小鼠糞便中的帶血情況進(jìn)行了檢測，如圖2-3所示，空白對照組的小鼠在整個實(shí)驗(yàn)周期中都幾乎沒有血便情況的發(fā)生。由于弓形蟲的共感染，在模型組中，近乎所有幼年小鼠都在第9天出現(xiàn)了嚴(yán)重的糞便帶血的臨床表現(xiàn)（3級）。對于可以顯著減少C.jejuni定植的LAB組，例如2009、L103和N8，按血便嚴(yán)重等級劃分，多達(dá)60％小鼠的糞便隱血指數(shù)已從3降低至2（P<0.05）。相反，未能有效減少小鼠C.jejuni定植量的大多數(shù)LAB組在緩解血便的過程中也沒有起到積極地作用（P>0.05）。圖2-3小鼠糞便隱血情況Fig.2-3Occurrencefobloodinfecalsamplesofmice當(dāng)小鼠的免疫系統(tǒng)發(fā)生嚴(yán)重?fù)p傷時(shí)，腸粘膜受損，血液從腸絨毛或腸腔進(jìn)入糞便，從而引起糞便中的流血癥狀。相反，血便減少意味著小鼠腸道損傷得以恢復(fù)[138]。在本文中，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在清除C.jejuni在體內(nèi)定植方便表現(xiàn)優(yōu)異的乳酸菌，可以有效降低小鼠糞便的隱血值，以此推斷出，隨著乳酸桿菌在腸道中的定植和繁殖，腸道屏障得以修復(fù)。同時(shí)，通過乳桿菌的干預(yù)，再次預(yù)防了C.jejuni對腸道的破壞。2.4.3乳酸菌對感染小鼠腸道病理變化的影響小鼠處死后收集了每組結(jié)腸樣品用于病理組織學(xué)分析。如圖2-4A所示，空白對照組中，結(jié)腸部位絨毛、隱窩正常，且有大量杯狀細(xì)胞位于結(jié)腸肌肉層。弓形蟲和C.jejuni的感染會導(dǎo)致小鼠的結(jié)腸發(fā)生嚴(yán)重的病理變化，包括杯狀細(xì)胞丟失，隱窩和絨毛結(jié)構(gòu)破壞以及炎性細(xì)胞浸潤（圖2-4B），此結(jié)果表明共感染可導(dǎo)致嚴(yán)重的炎癥和組織損傷。如圖2-4C、2-4D和2-4E所示，干預(yù)組2009、L

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本文編號：3453512