9-順式環(huán)氧類胡蘿卜素雙加氧酶（9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase, NCED）是ABA生物合成的限速酶。諸多研究表明NCED基因表達(dá)量的變化與ABA含量顯著相關(guān),在種子休眠過(guò)程中發(fā)揮重要作用。為探究草果AtNCED基因的序列特征和功能,本研究以草果（Amomum tsaoko Crevost et Lemarie）種子轉(zhuǎn)錄組為基礎(chǔ),采用RT-PCR技術(shù)克隆了一個(gè)AtNCED基因。該基因全長(zhǎng)2 372 bp,包含一個(gè)1 830 bp的開(kāi)放閱讀框（open reading frame, ORF）,編碼610個(gè)氨基酸。生物信息學(xué)分析顯示,AtNCED基因編碼的蛋白在N-末端包含典型的葉綠體轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列,在催化結(jié)構(gòu)域含有4個(gè)高度保守的組氨酸殘基。AtNCED蛋白與芭蕉科馬來(lái)西亞蕉同源性較高,與其他單子葉植物處在同一進(jìn)化分支。實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析結(jié)果表明,AtNCED基因表達(dá)量隨著層積時(shí)間的增加逐漸下降,該基因可能正向調(diào)控種子休眠,在草果種子休眠誘導(dǎo)與維持中發(fā)揮重要作用。進(jìn)一步地,利用同源重組方法,成功構(gòu)建了pBI121-AtNCED過(guò)表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)化至農(nóng)桿菌E... 

【文章來(lái)源】：分子植物育種. 2020,18(05)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【部分圖文】：

草果種胚總RNA凝膠電泳

草果AtNCED基因的PCR擴(kuò)增電泳

利用NCBI的CCD(Conserved domain database)軟件分析，結(jié)果表明AtNCED蛋白屬于RPE65超級(jí)家族成員(圖4)。在NCBI上進(jìn)行Blastp分析，下載氨基酸序列并利用DNAMAN進(jìn)行多序列比對(duì)，結(jié)果表明AtNCED氨基酸序列和其他植物NCED氨基酸序列在N端同源性較低(圖5)。AtNCED氨基酸序列與野生型馬來(lái)西亞蕉MaNCED氨基酸序列(XP＿009399013.1)同源性為81%，與海棗PdNCED氨基酸序列(XP＿008787808.1)同源性為74%，與棕櫚EgNCED氨基酸序列(XP＿010923828.1)同源性為73%，與水仙NtNCED氨基酸序列(AGT28471.1)同源性為72%，與鳳梨AcNCED1氨基酸序列(OAY73265.1)同源性為76%。說(shuō)明AtNCED與其他物種的NCED序列有較高的相似性，進(jìn)一步證實(shí)所克隆基因?yàn)椴莨鸄tNCED基因。圖4 草果NCED蛋白結(jié)構(gòu)域分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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