體外區(qū)室化（In vitro compartmentalization,IVC）是通過制備微液滴反應小室包裹單個基因（包含表達體系）或細胞進行反應和培養(yǎng),從而建立表現(xiàn)型與基因型的偶聯(lián),并借助流式細胞儀（Fluorescence-activatedcell sorting,FACS）對液滴進行超高通量檢測和篩選,進而快速獲得目標基因或細胞的一種方法。IVC-FACS篩選方法已被廣泛應用于蛋白質(zhì)工程、酶工程等定向進化研究。但早期利用機械分散法生成的微液滴大小均一性難以控制,嚴重影響液滴的定量檢測,降低了篩選的效率和準確性。隨著微流控芯片制備技術(shù)的快速發(fā)展,在芯片內(nèi)快速生成微液滴的技術(shù)也愈加成熟。本研究首先利用W/O （Water-in-oil）單層液滴生成芯片高速制備單分散的W1/O液滴,再將W1/O液滴重注入W/O/W （Water-in-oil-in-water）雙層乳化液滴生成芯片制備均一的W1/O/W2雙層乳化液滴。通過對油、水相流速與比值的優(yōu)化,可以生成直徑在15.4–23.2μm的單乳化微液滴,液滴可在培養(yǎng)數(shù)天內(nèi)保持穩(wěn)定。將單乳化液滴重注入雙層乳化液滴芯片,通過調(diào)整油相流速,可... 

【文章來源】：生物工程學報. 2020,36(07)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

W1/O/W2雙層乳化液滴生成流程圖

圖1 W1/O/W2雙層乳化液滴生成流程圖將分別盛有內(nèi)層水相W1、中間層油相O的注射器，由微管連接至單液滴生成芯片的水相W1、油相O入口處，通過微量注射泵控制水相W1、油相O的流速，兩者的流速分別為50–200μL/h和50–400μL/h。制備得到的均一、穩(wěn)定W1/O單層液滴通過微管經(jīng)芯片Outlet出口收集至盛有200μL少量體積的FC40容器(離心管或者注射器)。由于FC40密度大于水的密度，W1/O單層液滴浮在油相上方。

單層液滴穩(wěn)定性檢測：將生成的W1/O單層液滴置于37℃培養(yǎng)箱中，分別在0 h、8 h、12 h、24 h、36 h、48 h時取3–5μL液滴置于血球計數(shù)板上，在顯微鏡下，曝光條件為30 ms時觀察液滴，并拍照記錄，統(tǒng)計液滴大小，評估液滴的穩(wěn)定性。雙層液滴的穩(wěn)定性檢測：將生成的W1/O/W2型液滴置于37℃培養(yǎng)箱中，分別在0 h、24 h、48 h時取3–5μL液滴置于血球計數(shù)板上，在顯微鏡下曝光條件為30 ms時觀察液滴，并拍照記錄，評估液滴的穩(wěn)定性。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3452123