內(nèi)消旋-丁二醇脫氫酶（Meso-butanediol dehydrogenase,MBD）是睪丸酮叢毛單胞菌（Comamonas testosteroni,C.T.）ATCC11996中的一種酶。因其能夠催化反應(yīng)產(chǎn)生大量的乙偶姻（Acetoin,AC）和內(nèi)消旋-2,3-丁二醇（Meso-2,3-butanediol,meso-2,3-BD）生物產(chǎn)物,成為專(zhuān)家學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)。本文以MBD為研究對(duì)象,探索該酶在睪丸酮叢毛單胞菌中對(duì)甾體類(lèi)激素代謝的影響及基因調(diào)控情況。通過(guò)激素誘導(dǎo)、總RNA提取、全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、測(cè)序信息比對(duì)、基因擴(kuò)增、構(gòu)建基因表達(dá)載體、外源蛋白表達(dá)、蛋白質(zhì)親和層析純化、基因敲除、質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化、高效液相、ELISA等實(shí)驗(yàn)方法,結(jié)果表明:經(jīng)睪丸酮誘導(dǎo)后的C.T.菌中共有4835個(gè)基因在轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生了差異,有110個(gè)顯著差異基因,其中MBD基因差異Log2值達(dá)到1.80,與未誘導(dǎo)前差異達(dá)3.48倍。通過(guò)構(gòu)建MBD敲除型C.T.株,并使用高效液相色譜法檢測(cè)其對(duì)于睪丸酮、甲睪酮、雌酮、雌二醇等甾體類(lèi)激素的降解能力,研究表明將C.T.菌中的內(nèi)消旋-丁二醇脫氫酶基因敲除后對(duì)睪丸酮的降解率為27... 

【文章來(lái)源】：長(zhǎng)春理工大學(xué)吉林省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

MBD參與的主要反應(yīng)Fig1.1ThemainreactionofMBDparticipation

9圖 2.3 信息分析流程圖Figure 2.3 InformationAnalysis Flow Chart2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.3.1 C.T.菌生長(zhǎng)曲線每 1 h 取 1 mL 菌液在 600 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度結(jié)果如表 2-3 所示。表 2-3 菌液吸光度Table 2-3 Bacterial absorbance培養(yǎng)時(shí)間（h）CT1（OD） CT2（OD） CT （OD） T1（OD） T2（OD） T（OD）0 0.134 0.138 0.136 0.138 0.138 0.1381 0.124 0.122 0.123 0.130 0.132 0.1312 0.145 0.143 0.144 0.142 0.144 0.143

圖 2.4 clean reads 的堿基含量分布Figure 2.4 base content distribution of clean readsX 軸代表堿基在 read 中的位置，Y 軸為堿基的比例，不同顏色代表不同的堿基類(lèi)型。圖中6bp 的波動(dòng)為正常現(xiàn)象。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3438306