在諸多的體外腸道模型中,Caco-2細(xì)胞模型是目前使用最多也最為經(jīng)典的一種體外腸道模型。然而,Caco-2細(xì)胞是人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞,與健康的腸道上皮細(xì)胞之間存在較大差異。鑒于此,目前的體外腸道模型研究主要通過(guò)從腸道中分離腸道上皮干細(xì)胞,并在體外培養(yǎng)形成腸道類器官來(lái)重現(xiàn)天然腸道上皮,模擬腸道相關(guān)的生理功能。但是,干細(xì)胞的分離難度大,成本高,且密閉的腸道類器官形態(tài)不易開(kāi)展吸收轉(zhuǎn)化及相互作用等相關(guān)研究。因此,體外腸道模型亟需從3D的腸道類器官模型向2D的腸道界面模型轉(zhuǎn)變,通過(guò)對(duì)2D腸道界面兩側(cè)流體的控制,以更真實(shí)地模擬腸道界面。相比之下,2D腸道界面模型更利于研究者在體外研究食品、藥物、微生物等組分在腸道吸收、轉(zhuǎn)化或相互作用等生理現(xiàn)象�；诖�,本工作采用圖案化靜電紡聚乳酸納米纖維膜模擬腸道上皮的隱窩結(jié)構(gòu),以此作為原代腸道細(xì)胞的載體材料,構(gòu)建體外腸道模型,促使原代腸道細(xì)胞在體外形成2D細(xì)胞層,并充分分化表達(dá),實(shí)現(xiàn)對(duì)腸道組織的更真實(shí)模擬,并用于評(píng)估益生菌在腸道上皮的定殖性能及益生菌對(duì)腸道上皮細(xì)胞的影響。具體研究工作主要圍繞以下三個(gè)方面展開(kāi):1、制備了數(shù)種圖案化靜電紡聚乳酸納米纖維膜,通過(guò)原代腸道細(xì)... 

【文章來(lái)源】：浙江工商大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：85 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

腸層和隱窩的組織學(xué)[3]

3有研究發(fā)現(xiàn)，富含亮氨酸重復(fù)序列的G蛋白偶聯(lián)受體（LGR5）是腸道干細(xì)胞的標(biāo)志之一[10-12]。分離出的單個(gè)LGR5陽(yáng)性腸道干細(xì)胞Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路（LGR5+）埋入基質(zhì)凝膠（一種模擬細(xì)胞外基質(zhì)的物質(zhì)）中，并被添加細(xì)胞因子的培養(yǎng)基覆蓋時(shí)，可在基質(zhì)凝膠內(nèi)進(jìn)行無(wú)限增殖，同時(shí)保持遺傳穩(wěn)定性，進(jìn)而形成腸道類器官[13]。形成的腸道類器官整體呈3D結(jié)構(gòu)，內(nèi)腔具有清晰的隱窩-絨毛結(jié)構(gòu)，可保持管腔的極化，并可分化出所有的下游上皮細(xì)胞譜系。從腸道中分離出的隱窩也可產(chǎn)生類器官[14]。如圖1.2，直接分離出小鼠或人的腸道隱窩，將其嵌入基質(zhì)凝膠并在添加細(xì)胞因子的培養(yǎng)基中培養(yǎng)24-28h后形成球狀囊；培養(yǎng)至第5-7天時(shí)，在中央管腔周圍形成出芽的隱窩狀結(jié)構(gòu)，類似真實(shí)的腸道結(jié)構(gòu)[15]。圖1.2從鼠或人體活檢中提取的腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程[14]Fig.1.2Thecultureprocessofintestinalepithelialcellsextractedfrommouseorhumanbiopsies[14]隨后，Spence等人報(bào)道了另一種形成腸道類器官的方法，即誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSC）可以逐步分化為最終的內(nèi)胚層、中腸或后腸球體來(lái)生成3D類器官[16]。在體外將iPSC直接分化為腸組織對(duì)于生成包含隱窩樣祖細(xì)胞位、絨毛樣結(jié)構(gòu)域和所有腸上皮細(xì)胞分化圖1.3從多能干細(xì)胞體外分化為腸組織的示意圖[17]Fig.1.3Schematicdiagramofintestinaltissuedifferentiationfrompluripotentstemcellsinvitro[17]類型的3D類器官是非常重要的[17]。該方法如圖1.3所示，首先培養(yǎng)iPSC直到它們達(dá)到

3有研究發(fā)現(xiàn)，富含亮氨酸重復(fù)序列的G蛋白偶聯(lián)受體（LGR5）是腸道干細(xì)胞的標(biāo)志之一[10-12]。分離出的單個(gè)LGR5陽(yáng)性腸道干細(xì)胞Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路（LGR5+）埋入基質(zhì)凝膠（一種模擬細(xì)胞外基質(zhì)的物質(zhì)）中，并被添加細(xì)胞因子的培養(yǎng)基覆蓋時(shí)，可在基質(zhì)凝膠內(nèi)進(jìn)行無(wú)限增殖，同時(shí)保持遺傳穩(wěn)定性，進(jìn)而形成腸道類器官[13]。形成的腸道類器官整體呈3D結(jié)構(gòu)，內(nèi)腔具有清晰的隱窩-絨毛結(jié)構(gòu)，可保持管腔的極化，并可分化出所有的下游上皮細(xì)胞譜系。從腸道中分離出的隱窩也可產(chǎn)生類器官[14]。如圖1.2，直接分離出小鼠或人的腸道隱窩，將其嵌入基質(zhì)凝膠并在添加細(xì)胞因子的培養(yǎng)基中培養(yǎng)24-28h后形成球狀囊；培養(yǎng)至第5-7天時(shí)，在中央管腔周圍形成出芽的隱窩狀結(jié)構(gòu)，類似真實(shí)的腸道結(jié)構(gòu)[15]。圖1.2從鼠或人體活檢中提取的腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程[14]Fig.1.2Thecultureprocessofintestinalepithelialcellsextractedfrommouseorhumanbiopsies[14]隨后，Spence等人報(bào)道了另一種形成腸道類器官的方法，即誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSC）可以逐步分化為最終的內(nèi)胚層、中腸或后腸球體來(lái)生成3D類器官[16]。在體外將iPSC直接分化為腸組織對(duì)于生成包含隱窩樣祖細(xì)胞位、絨毛樣結(jié)構(gòu)域和所有腸上皮細(xì)胞分化圖1.3從多能干細(xì)胞體外分化為腸組織的示意圖[17]Fig.1.3Schematicdiagramofintestinaltissuedifferentiationfrompluripotentstemcellsinvitro[17]類型的3D類器官是非常重要的[17]。該方法如圖1.3所示，首先培養(yǎng)iPSC直到它們達(dá)到

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3429683