胚胎睪丸支持細(xì)胞（embryonic Sertoli cells,eSCs）是雄性胚胎發(fā)育過程中形成的第一種雄性特異性細(xì)胞,對性別決定具有至關(guān)重要的作用,并且分泌多種營養(yǎng)物質(zhì),能夠?qū)ζ渌N類細(xì)胞,如精原干細(xì)胞（spermatogonia stem cells,SSCs）起到支持?jǐn)U增或分化等功能。因此,對胚胎睪丸支持細(xì)胞發(fā)育形成機(jī)理進(jìn)行研究有助于揭示胚胎性腺發(fā)育和性別決定機(jī)制,為將來的臨床應(yīng)用提供指導(dǎo)作用。然而,采用常規(guī)的組織分離方法從小鼠雄性胚胎中難以大量提取胚胎睪丸支持細(xì)胞,阻礙了對胚胎睪丸支持細(xì)胞的基礎(chǔ)理論研究和實(shí)驗(yàn)應(yīng)用。因此,建立新的胚胎睪丸支持細(xì)胞的體外誘導(dǎo)獲取方法具有重要意義。近年來,有研究添加維甲酸（retinoic acid,RA）和激活素A（ActivinA）等物質(zhì),誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cells,ESCs）分化形成中間中胚層（intermediate mesoderm,IM）來源細(xì)胞,再通過卵泡刺激素（follicle stimulating hormone,FSH）等蛋白因子化合物誘導(dǎo)胚胎睪丸支持樣細(xì)胞（embryonic Sertol... 

【文章來源】：華東理工大學(xué)上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：156 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．２睪丸支持細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)＾??Ｆｉｇ．?１．２?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＳＣｓ??Ｅｐｓ：外質(zhì)特化作用（ｅｃｔｏｐｌａｓｍｉｃ?ｓｐｅｃｉａｌｉｚａｔｉｏｎｓ）?；?ＭＶＢ：多泡體（ｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒ?ｂｏｄｉｅｓ）；??ＳＥＲ：光滑型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ｓｍｏｏｔｈ?ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ?ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ?）；?ＲＥＲ：粗面型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ｒｏｕｇｈ??ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ?ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ）?；?Ｇｌｙ：糖原顆粒（ｇｌｙ?

華東理工大學(xué)博士學(xué)位論文?第７頁??ＧＡＴＡ４?ＩＨＣ??隨ｙ．ｅ綱??翁，：：姻??訪巧夂‘：ｆ．：汔，：Ｊ??圖１．３睪丸切片的形態(tài)結(jié)構(gòu)Ｍ??Ｆｉｇ．?１．３?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｔｅｓｔｉｃｌｅ??圖為小鼠睪丸組織石蠟切片，顯示對生精小管進(jìn)行橫向切割的截面。ＧＡＴＡ４是一種睪丸支持細(xì)胞表??達(dá)的特異性標(biāo)志物。圖中箭頭所指深褐色細(xì)胞為成熟睪丸支持細(xì)胞。藍(lán)色為精原干細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞??和精子。比例尺＝３００?｜ｉｍ。ＩＨＣ：免疫組織化學(xué)法（ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）??大量聚集的成熟睪丸支持細(xì)胞在體外會(huì)形成“魚貫狀”趨勢１４７１?（圖１．４Ａ）。睪丸支??持細(xì)胞一般擁有一個(gè)主核仁和兩個(gè)副核仁（圖１．４Ｂ）。在電子顯微鏡下，可見睪丸支??持細(xì)胞的細(xì)胞膜上有許多凹陷和凸起，并時(shí)常有空泡和油脂滴形成的空洞（圖１．４?Ｃ）。??細(xì)胞核膜上多皺褶，細(xì)胞核呈分葉狀，并與長軸延伸方向一致。成熟睪丸支持細(xì)胞呈不??規(guī)則的高椎體形（ｈｉｇｈ?ｖｅｒｔｅｂｒａｌ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ），細(xì)胞的基底部分附著基膜，而頂部則延伸??至曲細(xì)精小管的管腔［４８，６４〗。??睪丸支持細(xì)胞在不同發(fā)育階段的特異性標(biāo)志物（ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｂｉｏｍａｒｋｅｒ）會(huì)發(fā)生變化。??在胚胎和未成熟期的舉丸支持細(xì)胞中，高表達(dá)抗繆勒管激素（ａｎｔｉ?Ｍｕｌｌｅｒｉａｎ?ｈｏｒｍｏｎｅ，??ＡＭＨ，別名?ＭＩＳ）、ＧＡＴＡ?結(jié)合蛋白?４?（ＧＡＴＡｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ４，ＧＡＴＡ４）、腫瘤易感??基因?１?（Ｗｉｌｍｓ?ｔｕｍｏｒ?ｔｙｐｅ?１，ＷＴ１）、卵泡刺激素（ｆｏｌｌｉｃｌｅ?ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ?ｈｏ

第８頁?華東理工大學(xué)博士學(xué)位論文??一種標(biāo)志物，難以從動(dòng)物組織中特異性地標(biāo)記出睪丸支持細(xì)胞，需要通過幾種標(biāo)志物間??的交叉組合來進(jìn)行鑒定。??．ａｉｎｎｕ＾ａｒＶ??ｗＡ４?／?＃?，？??一?．??＿??圖１．４睪丸支持細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)??Ｆｉｇ．?１．４?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＳＣｓ??實(shí)驗(yàn)對小鼠睪丸中提取的成熟小鼠睪丸支持細(xì)胞，通過光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。??（Ａ?）成熟小鼠胚胎睪丸支持細(xì)胞體外培養(yǎng)條件下成紡錘狀伸展。??（Ｂ）成熟小鼠胚胎睪丸支持細(xì)胞具有多核結(jié)構(gòu)，通常具有１個(gè)主核，以及１－２個(gè)復(fù)核。??（Ｃ）電子顯微鏡下可見成熟小鼠胚胎睪丸支持細(xì)胞表面具有大量皺褶和空洞存在。??１．２．２睪丸支持細(xì)胞的滋養(yǎng)功能??睪丸支持細(xì)胞作為雄性性腺支持細(xì)胞，能夠分泌大量有利于其它細(xì)胞生存、擴(kuò)增和??發(fā)育分化的活性蛋白因子。這些細(xì)胞因子主要分為四種類型：類固醇（ｓｔｅｒｏｉｄ）、生長??因子（ｇｒｏｗｔｈ?ｆａｃｔｏｒ）、調(diào)節(jié)蛋白（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ?ｐｒｏｔｅｉｎ）和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒ）。??睪丸支持細(xì)胞分泌的類固醇主要是類固醇激素１；生長因子主要有激活素（ａｃｔｉｖｉｎ）??［７４】、轉(zhuǎn)化生長因子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ?ｇｒｏｗｔｈ?ｆａｃｔｏｒ，?ＴＧＦ）、抑制素（ｉｎｈｉｂｉｎ）、胰島素樣??生長因子（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ?ｇｒｏｗｔｈ?ｆａｃｔｏｒ，?ＩＧＦ）、生精生長因子（ｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｉｃ?ｇｒｏｗｔｈ?ｆａｃｔｏｒ，??ＳＧＦ）、白介素?１?（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１，ＩＬ－１）和白介素?６?（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]TRPC3 is required for the survival, pluripotency and neural differentiation of mouse embryonic stem cells（mESCs）[J]. Helen Baixia Hao,Sarah E.Webb,Jianbo Yue,Marc Moreau,Catherine Leclerc,Andrew L.Miller.  Science China（Life Sciences）. 2018(03)
[2]Percoll fractionation of adult mouse spermatogonia improvesgerm cell transplantation[J]. Kyu-Bom Koh,Masatoshi Komiyama,Yoshiro Toyama,Tetsuya Adachi,Chisato Mori.  Asian Journal of Andrology. 2004(02)



本文編號：3426249