發(fā)布時(shí)間：2021-10-09 05:57

　　脂肪是一種重要的代謝器官,在機(jī)體能量平衡方面具有非常關(guān)鍵的作用。隨著肥胖及肥胖相關(guān)疾病的普遍,脂肪細(xì)胞的分化過(guò)程引起人們的重視。前體脂肪細(xì)胞3T3-L1成脂分化過(guò)程是精細(xì)調(diào)控的系列事件,包括生長(zhǎng)抑制、克隆增殖、和終末分化。miRNAs是一類內(nèi)源sncRNA在脂肪細(xì)胞分化及脂質(zhì)代謝過(guò)程中發(fā)揮重要作用。據(jù)報(bào)道m(xù)iR-351-5p在脂肪組織分化過(guò)程發(fā)揮作用,但其在脂肪細(xì)胞分化和脂質(zhì)代謝過(guò)程的功能和機(jī)制尚未研究清楚。本研究以小鼠前體脂肪細(xì)胞3T3-L1為材料進(jìn)行成脂誘導(dǎo),探究miR-351-5p對(duì)前體脂肪細(xì)胞3T3-L1成脂分化過(guò)程的影響。1、miR-351-5p在3T3-L1細(xì)胞成脂分化過(guò)程中的表達(dá)變化通過(guò)qPCR及油紅O染色檢測(cè)miR-351-5p在成脂分化過(guò)程中的表達(dá)變化以及在小鼠不同組織的表達(dá)譜,發(fā)現(xiàn)miR-351-5p在成脂過(guò)程中表達(dá)呈上升趨勢(shì),在脂滴開(kāi)始積累的第8d達(dá)到表達(dá)量的峰值。2、miR-351-5p對(duì)3T3-L1細(xì)胞成脂分化的影響在前體脂肪細(xì)胞3T3-L1中轉(zhuǎn)染miR-351-5p mimics,利用qPCR及Western Blot檢測(cè)成脂相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)量的變化,結(jié)果發(fā)... 

【文章來(lái)源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

miRNAs加工途徑Figure1.1ThemiRNAprocessingpathway

miR-351-5p 對(duì)前體脂肪細(xì)胞 3T3-L1 成脂分化影響及作用機(jī)制在胰島素激活的下游激酶中，值得一提的是細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulatedkinase )ERK。ERK 的緊密調(diào)控是脂肪細(xì)胞分化的關(guān)鍵。而在分化后期激活 ERK 可抑制 PPARγ并抑制脂肪細(xì)胞分化[110]。miR-375 的表達(dá)量隨著 3T3-L1 脂肪細(xì)胞的分化時(shí)間的推移而增加，研究表明 miR-375 對(duì)于抑制 ERK1/2 磷酸化過(guò)程有作用，而該過(guò)程能夠促進(jìn)脂質(zhì)的積累[112]。綜合以上，可以肯定 miRNAs 在脂肪細(xì)胞發(fā)育的不同方面起著重要作用。毫無(wú)疑問(wèn)，與脂肪發(fā)生相關(guān)的 miRNAs 變化與各種代謝疾病有關(guān)。例如，let-7c/d/e、miR-320、miR-542-5p、miR-140、miR-143 在病理性肥胖的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞中相對(duì)于正常個(gè)體表達(dá)上調(diào)[28]。

觀察脂滴積累染 3T3-L1 細(xì)胞，在成脂過(guò)程的 7d、10d、14d 固定細(xì)胞，油紅累。異丙醇萃取脂滴后可以實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)脂滴積累量。（實(shí)驗(yàn)方過(guò)程脂滴積累）3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果脂過(guò)程表達(dá)變化和組織表達(dá)譜 成脂過(guò)程表達(dá)變化 qPCR 檢測(cè) miR-351-5p 的表達(dá)量，如圖 3.1，miR-351-5p 在中表達(dá)量呈上升趨勢(shì)，成脂 1d 表達(dá)量最低，成脂 8d 表達(dá)量達(dá)


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