【目的】核酸外切酶I （Exonuclease 1, EXO1）是一種多功能的3’→5’外切酶,主要應(yīng)用于清除DNA或RNA雙鏈分子中存在的單鏈。目前商品化的EXO1都是在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)量不高,且后續(xù)純化步驟復(fù)雜。人工合成核酸外切酶I sbcB基因,并在大腸桿菌中高效表達(dá)及純化�！痉椒ā坎捎弥丿BPCR合成sbcB基因,通過酶切將其克隆至表達(dá)載體pET-30a上并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）,經(jīng)IPTG誘導(dǎo),并對(duì)表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化,獲得限制性外切酶Ⅰ（EXO1）的大量表達(dá)。親和層析純化重組蛋白后對(duì)酶的活性進(jìn)行研究�！窘Y(jié)果】親和純化后獲得大量表達(dá)蛋白EXO1,大小與預(yù)測(cè)的54.5 KD相符;以S1核酸外切酶為對(duì)照進(jìn)行的功能驗(yàn)證證實(shí):sbcB基因表達(dá)產(chǎn)物EXO1能夠消化單鏈,但不會(huì)消化雙鏈,純化的EXO1具有很好的酶活性。【結(jié)論】依據(jù)本文方案制備的限制性外切酶Ⅰ（EXO1）產(chǎn)量高、純度高,適用于實(shí)驗(yàn)室測(cè)序前PCR產(chǎn)物的處理。 

【文章來源】：西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2020,33(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

sbcB基因序列

因目的基因總長(zhǎng)1428 bp,為了提高合成成功率,分兩段進(jìn)行合成。目的基因的電泳檢測(cè)結(jié)果如圖2所示,sbcb(1～22)和sbcb(21～42)的理論值分別為785和791 bp。從圖上可看出擴(kuò)增的條帶大小均在750～1000 bp之間,與預(yù)期理論值基本相符,可判斷目的基因擴(kuò)增成功。圖3 重組表達(dá)載體菌落

重組表達(dá)載體菌落

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3420139