天冬氨酸蛋白酶又稱酸性蛋白酶,在食品、發(fā)酵、飼料、醫(yī)藥和皮革等行業(yè)廣泛應(yīng)用。但這類蛋白酶的熱穩(wěn)定性通常較差,限制了它的應(yīng)用。因此,發(fā)掘高溫天冬氨酸蛋白酶資源或通過(guò)分子改良提高其熱穩(wěn)定性,對(duì)研究天冬氨酸蛋白酶的穩(wěn)定性機(jī)制、拓寬其應(yīng)用范圍具有重要意義。本文從具有不同特性（嗜酸、耐熱、低溫等）的絲狀真菌Talaromyces leycettanus JCM12802、Thermoascus crustaceus JCM 12803、Bispora sp.MEY-1和Penicillium sp.JJ-1中克隆了6個(gè)天冬氨酸蛋白酶基因（Tlap、Tlapa1、Tcapa、Bsapa、Psapa和Psapb）并成功地在畢赤酵母中進(jìn)行了表達(dá)。6個(gè)重組蛋白酶（TlAP、TlAPA1、TcAPA、BsAPA、PsAPA和PsAPB）的最適pH多在3.0?3.5之間,在pH 2.0?4.0的條件下具有高催化活力,它們能夠在酸性條件下保持穩(wěn)定,其中來(lái)源于嗜酸菌Bisporasp.MEY-1的BsAPA在酸性條件的穩(wěn)定性最好。這6個(gè)天冬氨酸蛋白酶活性和穩(wěn)定性受溫度的影響差異很大,來(lái)源于Penicillium... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：105 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

天冬氨酸蛋白酶的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)(Nascimentoetal.,2008)

8圖 1-2 天冬氨酸蛋白酶的催化機(jī)理 (Yegin and Dekker, 2013)Fig.1-2 Catalytic mechanism of aspartic protease普遍認(rèn)為，天冬氨酸蛋白酶的催化機(jī)理是催化殘基通過(guò)激活水分子形成親核試劑，然后攻擊

這種解折疊往往是可逆的；因此可以用來(lái)測(cè)量其熱力學(xué)穩(wěn)定性 (圖1-3)。1.3.2 影響酶熱穩(wěn)定性的因素當(dāng)前關(guān)于嗜熱酶的報(bào)道已有很多，而且越來(lái)越多的學(xué)者致力于嗜熱酶的結(jié)構(gòu)研究，并試圖破譯高溫適應(yīng)性的關(guān)鍵因素。初步研究發(fā)現(xiàn)影響酶熱穩(wěn)定性的因素很多，而不同酶之間也存有差異。酶的熱穩(wěn)定性更多時(shí)候并非單一因素決定的，往往是多種不同效應(yīng)累加的結(jié)果。因此，盡管當(dāng)前人們對(duì)這一領(lǐng)域進(jìn)行了廣泛的研究，但是并沒(méi)有形成成熟的理論體系。近來(lái)，一些與嗜熱酶熱穩(wěn)定性相關(guān)的結(jié)構(gòu)特征被提出，這也為通過(guò)蛋白質(zhì)工程提高酶的熱穩(wěn)定性提供了思路。1.3.2.1 內(nèi)在因素


本文編號(hào)：3416828