α-L-鼠李糖苷酶（α-L-rhamnosidase,E.C.3.2.1.40）是一類糖苷水解酶,可通過專一性水解黃酮類化合物末端的α-L-鼠李糖基從而提高其生物利用率及生物學(xué)活性。α-L-鼠李糖苷酶作為一類生物催化劑,有廣泛的應(yīng)用前景。目前已表征的細(xì)菌源GH78家族α-L-鼠李糖苷酶僅有19個(gè),有關(guān)其在生物催化應(yīng)用方面的報(bào)道主要集中在真菌,因此,新型細(xì)菌源α-L-鼠李糖苷酶資源的挖掘及其對(duì)天然黃酮糖苷的生物轉(zhuǎn)化研究具有重要意義。本研究首先利用基因組信息挖掘新酶發(fā)現(xiàn)策略,從解肝磷脂土地桿菌基因組中得到三個(gè)α-L-鼠李糖苷酶基因PhRha78D、PhRha78E和PhRha78G,通過傳統(tǒng)的雙酶切連接法構(gòu)建于表達(dá)載體pET-28a,轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21（DE3）進(jìn)行異源表達(dá),SDS-PAGE及酶活檢測(cè)結(jié)果表明,PhRha78D、PhRha78E、PhRha78G大部分以催化活性包涵體形式異源表達(dá)。PhRha78D酶活力較低,僅對(duì)PhRha78E和PhRha78G進(jìn)行了酶學(xué)特性研究,二者的最適pH分別為6.5和7.0,但最適反應(yīng)溫度卻相差很大,分別為60 ^oC和40 ... 

【文章來源】：山西大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

蘆丁、柚皮苷和橙皮苷分子結(jié)構(gòu)

圖 2.1 α-L-鼠李糖苷酶基因 PhRha78 的 PCR 擴(kuò)增結(jié)果Fig. 2.1 PCR amplification of α-L-rhamnosidase genes PhRha78A)、(B)、(C)圖中的泳道 2 分別代表 PhRha78D、PhRha78E 和 PhRha78G 的 PCR 產(chǎn)表示 DNA Marker。Lane 2 in (A), (B), and (C) are the PCR products of PhRha78D, PhRha78E, and PhRhavely. Lane M is DNA Marker..2.2 菌落 PCR 鑒定PhRha78D、PhRha78E、PhRha78G 的陽性克隆分別應(yīng)該在約 2900 bp、240 bp 處存在單一條帶。陽性克隆 PCR 鑒定結(jié)果圖 2.2-2.4 表明，其陽性克 4 個(gè)、3 個(gè)、4 個(gè)。分別選擇兩個(gè)陽性克隆送去測(cè)序，測(cè)序結(jié)果顯示，目酸序列與其理論序列相一致，表明三個(gè)目的基因分別成功插入至表達(dá)載體]。

圖 2.2 PhRha78D 陽性克隆 PCR 鑒定結(jié)果Fig. 2.2 Identification for positive clones PCR of PhRha78D

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3408104