目的:miRNA分子被廣泛用于各種疾病的研究,是臨床上診斷、預(yù)后的重要生物標(biāo)志,但因其分子較小,且在組織中的表達(dá)量水平很低,傳統(tǒng)的核酸提取方法無法對(duì)其進(jìn)行高效提取,因此本文擬構(gòu)建一套用于miRNA高效提取的磁珠法提取體系。方法:在傳統(tǒng)的核酸提取方法的基礎(chǔ)上,本研究主要選擇LGC、PuriMag和WD三個(gè)品牌不同的磁珠進(jìn)行miRNA提取體系的建立,主要探討了磁珠用量和裂解液pH對(duì)體系提取miRNA的影響,并用實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果:WD磁珠（25 mg/mL）在磁珠使用量為30μL、裂解液pH=8.0時(shí),提取效果最好。結(jié)論:研究建立了一套以WD磁珠為核心miRNA提取體系,為miRNA提取方法的進(jìn)一步優(yōu)化奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：中國計(jì)量大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,31(04)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

三種磁珠不同用量條件下的Ct值

當(dāng)磁珠用量均為30 μL,在同樣的檢測(cè)樣本量條件下,在不同裂解液pH條件下,3種不同磁珠的提取效率也表現(xiàn)出一定的差異(如圖2)。裂解液pH值太大或太小都會(huì)嚴(yán)重影響磁珠的提取性能,pH值在7.0～9.0之間是3種磁珠提取體系較適宜的酸堿工作范圍,當(dāng)pH值為8.0時(shí),三種磁珠的qPCR的Ct值皆最小,說明此時(shí)對(duì)miRNA的提取效率最高,LGC和WD磁珠的提取效率相比PuriMag磁珠略高,但沒有顯著性差異。3)3種磁珠提取體系性能的比較

在3種磁珠最適的磁珠用量(30 μL)、pH(8.0)條件下提取相同量的樣本,多次重復(fù),并與對(duì)照組Promega試劑盒提取結(jié)果進(jìn)行比較,如圖3所示,LGC、PuriMag、WD三種磁珠體系以及對(duì)照組Promega平均Ct值分別為27.83、28.25、27.5和27.15。利用SPSS顯著性差異分析(t檢驗(yàn)),LGC、PuriMag與Promega有顯著性差異(t檢驗(yàn)的P值分別為0.037、0.028,P≤0.05),表明LGC、PuriMag與Promega相比具有明顯差距。而WD磁珠提取體系提取miRNA的效率與對(duì)照組Promega試劑盒組相比,二者沒有顯著性差異,提取性能相當(dāng)。這說明WD磁珠提取體系提取miRNA的效率在3種磁珠提取體系中最高,可以替代Promega試劑盒提取試劑盒。3 討 論

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]From blood to breath: New horizons for esophageal cancer biomarkers[J]. Roger Yazbeck,Simone E Jaenisch,David I Watson.  World Journal of Gastroenterology. 2016(46)



本文編號(hào)：3407128