果聚糖是廣泛應(yīng)用于食品、保健品和制藥工業(yè)中的功能性多糖。目前,獲得果聚糖的方法有兩種,一種是植物來源,另一種是微生物來源的酶直接合成。細(xì)菌來源的合成果聚糖的酶有兩種,菊糖蔗糖酶（EC 2.4.1.9）和果聚糖蔗糖酶（EC 2.4.1.10）。其中,菊糖蔗糖酶的研究很少,酶學(xué)特性和晶體結(jié)構(gòu)信息都不是很清楚。為了獲得催化效率較好的菊糖蔗糖酶,本文從CAZy數(shù)據(jù)庫中篩選了一段來源于Brevibacillus formosus的糖苷水解酶。通過對B.formosus來源的糖苷水解酶序列進(jìn)行分析,該序列與Bacillus korlensis（WP₀660521 62.1）來源的果聚糖蔗糖酶相似性為78.55%,與Bacillus agaradhaerens WDG185（ATN45518.1）來源的菊糖蔗糖酶的相似性為72.01%,將其命名為Inu-Bfor。通過大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)獲得了高表達(dá)量的可溶性蛋白（蛋白含量約為1.5 mg/mL）,并進(jìn)行了酶學(xué)性質(zhì)的研究。Inu-Bfor最適溫度為35℃,具有極好的熱穩(wěn)定性,45℃條件下的半衰期為34 h。最適pH為6.0,pH5.... 

【文章來源】：安徽大學(xué)安徽省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｇｒａｐｈ?ｏｆ?ｇｌｕｃｏｓｅ??－？［７３］

催化水解蔗糖生成１?Ｍｍｏｌ葡萄糖所需要的酶量為１個Ｕ。??以葡萄糖濃度作為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的〇Ｄ５４〇作為縱坐標(biāo)，繪制出葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)??曲線圖２－１。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Ｙ＝０．００５５Ｘ－０．２２４３，Ｒ２＝０．９９８。其中Ｙ為ＯＤ５４０??的吸光值，Ｘ為體系中葡萄糖的濃度Ｏｉｇ／＾Ｌ）。??０．８－１??０＿７?－?Ｙ＝０．?００５５Ｘ－０．?２５４３?ｙ??ｎ，?Ｒ＾Ｏ．?９９８?Ｚ??０?０．５－?Ｘ??ｉ?０－４－??０．３－?Ｘ??０．２－??０？１??８０?１００?１２０?１４０?１６０?１８０?２００??Ｃ＞?Ｉｎ?ｃｏｓｅ?（ｔｉｇ／ｕ?Ｌ）??圖２－１葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｇｒａｐｈ?ｏｆ?ｇｌｕｃｏｓｅ??Ｉｎｕ－Ｂｆｏｔ？蛋白濃度使用Ｂｒａｄｆｏｒｄ法［７３］進(jìn)行測定，該方法是以牛血清蛋白濃??度作為橫坐標(biāo)，〇Ｄ５９５作為縱坐標(biāo)繪制出標(biāo)準(zhǔn)蛋白濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖２－２，標(biāo)??準(zhǔn)曲線方程為Ｙ＝?０．００４７Ｘ?＋?０．０９２

估測抽提質(zhì)粒的濃度后再將ｐＥＴ－２８ａ（＋；）－ＩｎＵ－Ｂｆ〇ｒ重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至??￡．ｃｏ／／ＢＬ２１（ＤＥ３）感受態(tài)細(xì)胞中，在平板上挑取數(shù)個單菌落，進(jìn)行培養(yǎng)。再用??雙酶切方法驗(yàn)證陽性克隆，雙酶切結(jié)果如下圖２＞４所示，Ｉｎｕ－Ｂｆｏｉ？基因片段大??小為１２６９?ｂｐ，與圖中箭頭所指條帶位置一致。將培養(yǎng)至生長期的菌液保藏于??１５％甘油中

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3400786