將黑曲霉屬XynB基因和豬RELMβ基因核心啟動子區(qū)克隆到pcDNA3.1（-）中,構(gòu)建攜帶綠色熒光和Myc雙標(biāo)記的腸道特異表達(dá)載體pcDNA3.1-RELMβ-XynB-Myc-GFP。利用脂質(zhì)體介導(dǎo)將載體轉(zhuǎn)染人結(jié)腸癌細(xì)胞（HT29）和人肝癌細(xì)胞（Bel7402）,熒光顯微鏡檢測發(fā)現(xiàn),該載體可在HT29細(xì)胞特異表達(dá)綠色熒光蛋白;對轉(zhuǎn)染該表達(dá)載體的HT29細(xì)胞進(jìn)行RT-PCR檢測和WB分析,結(jié)果表明,XynB基因在HT29細(xì)胞中正常轉(zhuǎn)錄,并且在細(xì)胞內(nèi)檢測到目的蛋白表達(dá)。 

【文章來源】：江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,48(11)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌種和質(zhì)粒
        1.1.2 主要試劑和工具酶
    1.2 方法
        1.2.1 真核表達(dá)載體pcDNA3.1-XynB-Myc的構(gòu)建
        1.2.2 pcDNA3.1-XynB-Myc-GFP的構(gòu)建
        1.2.3 豬RELMβ基因啟動子指導(dǎo)的腸道特異表達(dá)載體構(gòu)建
        1.2.4 XynB在HT29細(xì)胞的特異表達(dá)
        1.2.5 XynB基因在HT29細(xì)胞中的表達(dá)鑒定
2 結(jié)果與分析
    2.1 真核表達(dá)載體pcDNA3.1-XynB-Myc的構(gòu)建
    2.2 載體pcDNA3.1-XynB-Myc-GFP的構(gòu)建
    2.3 腸道特異表達(dá)載體pcDNA3.1-RELMβ-XynB-Myc-GFP構(gòu)建
    2.4 XynB在HT29細(xì)胞中的特異表達(dá)
    2.5 XynB基因在HT29細(xì)胞表達(dá)鑒定
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬RELMβ基因啟動子區(qū)克隆及序列分析[J]. 陳哲,雷明明,于建寧,王公金,施振旦.  江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2015(05)
[2]木聚糖酶-甘露聚糖酶融合酶基因Linker優(yōu)化及其在豬腎pK15細(xì)胞中共表達(dá)[J]. 張獻(xiàn)偉,張冠冠,吳珍芳,孟繁明,劉德武,張茂,許衛(wèi)華,鄭恩琴,賀曉燕,李真,李紫聰.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(22)
[3]IGF-1毛囊特異表達(dá)載體的構(gòu)建以及轉(zhuǎn)染絨山羊胎兒成纖維細(xì)胞的研究[J]. 郭旭東,尹俊,楊東山,毛舒燕,寶明濤,旭日干.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2009(10)
[4]綿羊毛發(fā)角蛋白結(jié)合蛋白啟動子的克隆與活性分析[J]. 王春生,安鐵洙,白秀娟,任洪林,柳增善.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2008(02)
[5]黑曲霉產(chǎn)木聚糖酶穩(wěn)定性的研究[J]. 聶國興,王修啟,明紅,李春喜,李用芳,周洪琪.  華北農(nóng)學(xué)報. 2004(01)



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