木質(zhì)纖維素是地球上最豐富的可再生生物質(zhì)。天然的木質(zhì)纖維素材料含有纖維素、半纖維素和木質(zhì)素等,纖維素在木質(zhì)纖維素中為最簡單的成分,半纖維素和木質(zhì)素包裹在纖維素的外面,形成了一種天然屏障,這層天然屏障在保護(hù)植物的同時(shí),使得人工進(jìn)行生物降解轉(zhuǎn)化的效率很低,無法適應(yīng)大規(guī)模工業(yè)化的要求。自然界中存在一些降解木質(zhì)纖維素材料的生物系統(tǒng),白蟻也為一種,白蟻和共生細(xì)菌由來木質(zhì)纖維素酶具有較高的酶活和良好的耐堿性。本文以白蟻和共生細(xì)菌為對(duì)象,探究了幾種木質(zhì)纖維素酶的協(xié)同作用,同時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)室前期分離得到的厭氧菌Dysgonomonas macrotermitis開展了相關(guān)研究,該屬為黃翅大白蟻（Macrotermes barneyi）腸道第二優(yōu)勢菌群,具有纖維素活性,為了得到酶學(xué)性質(zhì)較好的木質(zhì)纖維素酶,進(jìn)而加快其在工業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用,我們進(jìn)行了如下研究:M barneyi后腸D.macrotermiD.木聚糖酶的異源表達(dá)。通過基因組測序、blast比對(duì)分析和分子生物學(xué)方法,找到5個(gè)木聚糖酶基因,并在E.coli JM109中克隆表達(dá),發(fā)現(xiàn)只有DysxynB（orf-00078）和DysxynE（orf-03642... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．１?ｐＱＥ３０質(zhì)粒圖譜??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?Ｐｌａｓｍｉｄ?ｍａｐ?ｏｆ?ｐＱＥ３０?ｖｅｃｔｏｒ．??

?９３％?Ｄ．?ｇａｄｅｉ??分別選取了與兩個(gè)木聚糖酶同源性較高（大于７０％）的２０個(gè)基因片段，通??過鄰位法作出進(jìn)化樹（圖２．２）。ＤｙｓｘｙｎＢ與Ｄ．ｇａｃ／ｄ中注釋的預(yù)測基因有９８％??的同源性，該菌株分離于人體的臨床標(biāo)本。與ＤｙｓｘｙｎＥ在一個(gè)進(jìn)化分支上的為??－－株命名為Ｂａｒｂ４的擬桿菌來源的木聚糖酶，其同源性較低，為１９％。??９９?Ｖｉ��？?０１０６６３０２３．１?ＭｚｒｂｔＨａｂｉ／ｉａ?＾ａｂｎｏｎｋｏｌｏｒ???—?ＷＴ?０１６７７８７０４．１?Ａｎａｅｒｏｐｈａｇａ?ｉｈｅｒｍｏｈａｂｐｋｉｌａ????ＷＴ?１０１４８６Ｓ２２．１?Ｄｙｚｇｏｎａｍｏｎａｄａｃｔａｅ?ｂａｃｔｅｒｉｕｍ??４３??１９＿?＾ＷＰ?０６２１７５２０９．１?Ｄｙｓｇｏｎｏｍｏｎａｓ?ｍａｃｒｏｔｅｒｍｔｉｉｓ??＇ＡＴ?０６６２４１０４１．１?Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ?ｂａｃｉｅｒｉｕｍＢｘＭ??＾?ＯＪＶ８９９１３．１?Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｉａ?ｂａｃｔｅｒｉｕｍ?４４－１０??ＯＦＸ５２８５６．１?Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔａｓ?ｂａｃｔａｒｉｗｎ?ＧＷＣ２?４６?３５０??１００?ＷＰ?０８７３２２４４０．１?Ｂａｃｉｔｒｏｉｄｔｓ?ｘｙｌａｎｉｓｏｈｅｎｓ???—?４８?ＷＰ?００Ｓ０２６０３Ｓ．１?Ｂａｃｉｅｒｏｋｋｓ?ｘｙｌｅｍｉｓｏＳ＇ｅ／ａ??ＣＢＨ３２８２３?１?ｄａｃｔｅｒｏｋｋｓ?ｘｙｌｃｍｉｓｏ＼ｅｍ?ＸＢ１Ａ??抑?９２?ＷＰ?１０１６８９４９８．１?Ｄｙｚｇｏｎｏｍｏｎａｓ?ｓｐ．?Ｍａｒｓｅｆｌｌｅ－Ｐ４３５６????９９?■?ＷＰ?０７０８０

?山東大學(xué)碩士學(xué)位論文???２．４．２在大腸桿菌中表達(dá)Ｄｙｓｘｙｎｓ??２．４．２．１表達(dá)載體的構(gòu)建??使用基因組提取試劑盒成功得到乃．ｗａｃｒｏ／ｅｒｗ／ｔｏ?ＪＣＭ１９３７５Ｔ的基因組，使??用２．３．３步驟中的方法進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增，得到５個(gè)不同大小的Ｄｙｓｘｙｎｓ片段（圖??２．３Ｂ?１－５：９７８、１１１６、９９０、９８７?和?７９５?ｂｐ），將片段構(gòu)建于?ｐＱＥ３０?表達(dá)載體，分??別獲得５個(gè)重組質(zhì)粒，對(duì)其命名為ｐＱＥ３０－ＤｙｓｘｙｎＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ。??Ａ?Ｂ?ｃ??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]利用游離型表達(dá)質(zhì)粒強(qiáng)化畢赤酵母表達(dá)木聚糖酶[J]. 潘陽,吳丹,吳敬.  生物工程學(xué)報(bào). 2018(05)
[2]β-甘露聚糖酶和木聚糖酶基因在大腸桿菌中共表達(dá)[J]. 高海有,劉正初,段盛文,成莉鳳,石巖,馮湘沅,鄭霞,鄭科,宋志姣.  微生物學(xué)通報(bào). 2012(03)
[3]臺(tái)灣家白蟻內(nèi)切葡聚糖酶活性中心氨基酸的飽和突變[J]. 林麗華,秦國梅,韋宇拓,杜麗琴,龐宗文,黃日波.  生物工程學(xué)報(bào). 2009(06)
[4]棉花黃萎病真菌Verticillium dahliae木聚糖酶基因的克隆、表達(dá)和酶學(xué)性質(zhì)分析[J]. 張桂敏,饒犇,葉戔,馬立新,張先恩.  微生物學(xué)報(bào). 2008(06)
[5]釀酒酵母gpd1和hor2基因在大腸桿菌中的共表達(dá)[J]. 杜麗琴,韋宇拓,陳發(fā)忠,羅兆飛,黃日波.  生物工程學(xué)報(bào). 2005(03)
[6]利用不相容質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化大腸桿菌對(duì)Cre重組酶體內(nèi)重組活性的可視檢測[J]. 龐永奇,賈洪革,方榮祥,郭藹光,陳曉英.  微生物學(xué)報(bào). 2005(01)
[7]畢赤酵母表達(dá)外源基因研究進(jìn)展[J]. 王勇.  微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2004(01)
[8]人血管抑素在畢氏酵母中的表達(dá)及其活性測定[J]. 辛利,張勵(lì),徐韌,張倩,葉勤,李載平,甘人寶.  生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào). 2001(03)

碩士論文
[1]纖維素酶和木聚糖酶在釀酒酵母中的共表達(dá)及應(yīng)用研究[D]. 夏武成.湖北大學(xué) 2018
[2]黃翅大白蟻及其共生菌由來β-葡萄糖苷酶的研究[D]. 姜淑喆.山東大學(xué) 2018
[3]黃翅大白蟻腸道微生物多樣性及幾丁質(zhì)降解微生物的分離與鑒定[D]. 孫新新.山東大學(xué) 2017
[4]白蟻及其腸道微生物來源木質(zhì)纖維素酶基因的克隆與表達(dá)[D]. 寧娜.山東大學(xué) 2017
[5]天然纖維素降解過程中的多酶協(xié)同作用研究[D]. 高媛.湖北大學(xué) 2016
[6]黃翅大白蟻后腸細(xì)菌來源木聚糖酶的純化與基因克隆以及培菌白蟻菌圃微生物多樣性研究[D]. 石小玉.山東大學(xué) 2015
[7]β-葡萄糖苷酶基因和內(nèi)切葡聚糖酶基因在大腸桿菌中的共表達(dá)及發(fā)酵條件研究[D]. 萬玉軍.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[8]細(xì)菌纖維素外切酶基因的篩選及耐熱纖維素酶基因在枯草桿菌系統(tǒng)里的表達(dá)[D]. 劉建明.華東理工大學(xué) 2011
[9]熱穩(wěn)定性細(xì)菌葡聚糖內(nèi)切酶的克隆與表征[D]. 邱立歡.華東理工大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3391838