VQ蛋白是一類與生長發(fā)育以及響應(yīng)環(huán)境脅迫相關(guān)的植物特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)控輔助因子,其氨基酸序列僅在VQ結(jié)構(gòu)域處高度保守。并且大多數(shù)擬南芥VQ基因不含內(nèi)含子,其編碼的蛋白質(zhì)氨基酸殘基的數(shù)目大多都少于300。研究表明,含有VQ（FxxxVQxLTG）結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)與WRKY轉(zhuǎn)錄因子互作,進一步的分析表明,VQ結(jié)構(gòu)域中保守的V和Q殘基對于與WRKY蛋白的互作特別重要。另外,VQ蛋白并非與所有的WRKY家族成員互作,而是僅與Ⅰ亞族和Ⅱc亞族的WRKY蛋白互作。VQ蛋白與WRKY蛋白結(jié)合后,形成蛋白復(fù)合體共同對下游靶基因進行調(diào)控。本研究對擬南芥中功能尚屬未知的VQ3基因開展了相關(guān)研究,取得的主要結(jié)果如下:1.擬南芥AtVQ3基因的功能分析構(gòu)建了帶有GFP報告基因的pCAMBIA2300GFP-AtVQ3載體,然后注射煙草利用瞬時表達系統(tǒng)進行研究發(fā)現(xiàn),該蛋白定位于細胞核內(nèi)。之后利用CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)獲得了atvq3突變體植株,對F1代進行表型鑒定,發(fā)現(xiàn)功能缺失突變體相比于野生型擬南芥植株發(fā)生矮化現(xiàn)象并且蓮座葉葉片呈橢圓形。2.擬南芥AtVQ3基因的表達模式分析對不同器官中的AtVQ3基因的... 

【文章來源】：山東師范大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

擬南芥VQ蛋白結(jié)構(gòu)域的分析

圖 2 擬南芥 VQ 蛋白的系統(tǒng)發(fā)育樹[12]Fig. 2 Phylogenetic trees of the VQ proteins fromArabidopsis白生物學(xué)功能研究 VQ14 基因在種子胚乳發(fā)育早期中表達量升高，當該基因種子變小[11]，進一步探究表明：VQ14 蛋白在種子發(fā)育過6]。過量表達 AtVQ29 基因發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因植株在遠紅光或弱的長度明顯要比野生型長，該基因 T-DNA 插入或轉(zhuǎn)座子生型短[13,14]，并且 VQ29 基因還能夠調(diào)控花的發(fā)育，其過延遲[14]。過量表達 VQ17 基因發(fā)現(xiàn)植株的生長發(fā)育變得錄本升高同樣具有發(fā)育遲緩的表型，而且 VQ8 基因功能過程中也受到抑制，在整個生命周期中顯示出葉片呈淺綠

圖 3 重組質(zhì)粒 AtU6-26-sgRNA-SK-AtVQ3 圖譜Fig.3 Map of recombinant plasmid of AtU6-26-sgRNA-SK-AtVQ37） 取 2μg pCAMBIA1300-pYAO-Cas9 質(zhì)粒 10U SpeⅠ（50μl 體系）37℃酶切 30min，PCR 儀 80℃，20min，電泳切膠回收；8） sgRNAcassette 連接反應(yīng)試劑 體積（μL）10×T4 DNAligase buffer 1 μl酶切后的 pCAMBIA1300-pYAO-Cas9 載體 40 ngsgRNAcassette 10-20 ngT4 DNAligase 0.2 μl

【參考文獻】：
期刊論文
[1]擬南芥VQ基因家族響應(yīng)抗性相關(guān)激素表達譜分析[J]. 林淵源,余迪求.  植物分類與資源學(xué)報. 2012(05)



本文編號：3390705