群體感應(yīng)（Quorum sensing,QS）是一種細(xì)胞間交流機(jī)制,能調(diào)控生物被膜、腐敗酶和毒力因子分泌等。生物被膜是細(xì)菌的結(jié)構(gòu)化群落,細(xì)菌粘附于其表面并嵌入細(xì)胞外聚合物質(zhì)的自身基質(zhì)中,由于生物被膜對(duì)抗菌劑具有很高的抵抗力,引起一系列食品加工行業(yè)的潛在安全性問題。熒光假單胞菌是重要嗜冷腐敗菌和強(qiáng)生物被膜生成菌株,而金黃色葡萄球菌是國(guó)內(nèi)水產(chǎn)品中常見的條件致病菌,其生物被膜也引起關(guān)注。植物精油（Essential oils,EOs）具有抗微生物、抗病毒、抗氧化等功能,常被用作食品防腐劑以控制食物腐敗和食源性致病細(xì)菌。本研究以冷藏大黃魚中分離的致腐熒光假單胞菌、殺鮭氣單胞菌和金黃色葡萄球菌（金葡菌）為研究對(duì)象,從10種精油物質(zhì)肉桂醛和香芹酚的結(jié)構(gòu)類似物中篩選得到抑菌和抗生物被膜能力效果最好的香芹酚;以群體感應(yīng)為切入點(diǎn),比較香芹酚對(duì)熒光假單胞菌野生株和LuxI缺失株的抗生物被膜能力及酰基高絲氨酸內(nèi)酯（AHLs）活性的差異變化,分子對(duì)接和轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序探究香芹酚對(duì)熒光假單胞菌的差異表達(dá)基因和代謝通路影響;進(jìn)一步研究熒光假單胞菌和金葡菌在魚汁基質(zhì)中共培養(yǎng)的互作,探討混合生物被膜對(duì)香芹酚的抗性作用。研... 

【文章來源】：浙江工商大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：153 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

混合物種生物被膜的發(fā)展過程圖[14]

浙江工商大學(xué)碩士學(xué)位論文8球菌可產(chǎn)生兩種類型的生物被膜基質(zhì)，一種胞外多糖，另一種表面蛋白。實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明，Agr系統(tǒng)不能調(diào)節(jié)胞外多糖的合成。與此相反，它下調(diào)表面粘附素如纖連蛋白結(jié)合蛋白和蛋白A的表達(dá)[48]，其特定的環(huán)境條件下能誘導(dǎo)分泌蛋白質(zhì)[49]。最近，已經(jīng)確定了Agr系統(tǒng)在生物被膜分散中的其他作用。證明表皮葡萄球菌然后在金黃色葡萄球菌中AGR的主要影響一個(gè)特定的類分泌肽具有類似表面活性劑介導(dǎo)生物被膜分散性質(zhì)[50]。類分泌肽操縱子的轉(zhuǎn)錄受AgrA嚴(yán)格控制，因此Agr突變體缺乏類分泌肽產(chǎn)生。使用共聚焦激光掃描顯微鏡對(duì)生物被膜三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析表明，類分泌肽不僅是生物被膜分散所必需的，而且還會(huì)影響生物被膜的體積，厚度，粗糙度和通道形成。類分泌肽衍生出淀粉樣蛋白樣纖維，在這些特定條件下有助于生物被膜的發(fā)育，缺乏類分泌肽的突變體則無法產(chǎn)生生物被膜。結(jié)果表明，類分泌肽作為單體，具有促進(jìn)生物被膜分解的表面活性劑性的能力，但是當(dāng)其在纖維中聚合時(shí)，有利于生物被膜的發(fā)展。圖1.2群體感應(yīng)及其調(diào)控生物被膜的分子機(jī)制[48]Fig.1.2QuorumsensinganditsmoLecularmechanismsregulatingbiofilms.1.4精油1.4.1精油目前，許多抗生素可用于治療各種細(xì)菌。然而增加的多藥耐藥性導(dǎo)致細(xì)菌引起的問題越來越嚴(yán)重。此外，宿主細(xì)胞的低免疫力和細(xì)菌發(fā)展與生物被膜相關(guān)的耐藥性的能力進(jìn)一步增加了人類威脅生命的細(xì)菌感染的數(shù)量[51]。因此，細(xì)菌感染仍是人類死亡的主要

浙江工商大學(xué)碩士學(xué)位論文1499.0%），咖啡酸（CA，98.0%），反式肉桂酸（TA，99.0%），香芹酚（CAR，99.0%），丁子香酚（E，98.0%），薄荷醇（M，99.0%），百里酚（T，98.5%）和香芹酚甲醚（CME，98.0%），均購(gòu)自Sigma-Aldrich（美國(guó)密蘇里州圣路易斯市），使用之前使用二甲基亞砜（dimethylsulfoxide，DMSO，Sigma-Aldrich）溶解稀釋后。10種EOs的化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1所示；TSB培養(yǎng)基：青島海博生物科技有限公司；色譜級(jí)甲醇：阿拉丁生化科技有限公司；分析純乙酸乙酯：上海凌峰試劑有限公司；卡那霉素：杭州昊天生物技術(shù)有限公司；6孔板、24孔板、96孔細(xì)胞培養(yǎng)板：無錫NEST生物技術(shù)有限公司。圖2.110種EOs成分的結(jié)構(gòu)Fig2.1StructureoftenEOcomponents2.2.3主要儀器設(shè)備表2.1實(shí)驗(yàn)儀器Tab.2.1Experimentinstrument儀器名稱和型號(hào)生產(chǎn)單位恒溫振蕩器THZ-C蘇州培英實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司全自動(dòng)高壓滅菌鍋美國(guó)Millipore公司臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)Sigma公司LRH-250A型生化培養(yǎng)箱上海一恒科技有限公司SK7210HP型超聲清洗器上�？茖�(dǎo)超聲有限公司酶標(biāo)儀VICTORX美國(guó)PerkinElmer公司CX21型光學(xué)顯微鏡日本Olympus公司紫外可見分光光度計(jì)UV-2550日本島津公司液相色譜串聯(lián)三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀Agilent公司香芹酚丁子香酚薄荷醇百里酚香芹酚甲醚肉桂醛反式肉桂醛肉桂醛乙酯咖啡酸反式肉桂酸

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]大黃魚源氣單胞菌的分離鑒定及致腐表型[J]. 葛陽楊,朱軍莉,劉麗,任奕婧.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2017(06)
[2]冷藏大黃魚SSO希瓦氏菌致腐能力差異機(jī)制初探[J]. 趙二科,朱軍莉,馮立芳,施永清,勵(lì)建榮.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2015(02)
[3]環(huán)二鳥苷酸信號(hào)系統(tǒng)研究進(jìn)展[J]. 王昭圓,馮兆瑾,金蕾,嚴(yán)杰,林旭璦.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2014 (06)
[4]GB T5009—2003《食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法》理化部分簡(jiǎn)介[J]. 王竹天,蘭真,魯杰,蔣定國(guó).  中國(guó)食品衛(wèi)生雜志. 2005(03)



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