發(fā)布時(shí)間：2021-09-05 18:57

　　【目的】探討在巰乙基磺酸鈉（MESNa）與碳酸氫銨（NH₄HCO₃）存在下,對在大腸桿菌上表達(dá)的重組融合蛋白中內(nèi)含肽（Intein）用硫醇（DTT）進(jìn)行自剪切,促使抗菌肽（MME）碳末端實(shí)現(xiàn)酰胺化�！痉椒ā繕�(gòu)建用大腸桿菌表達(dá)內(nèi)含肽介導(dǎo)的MME重組質(zhì)粒,通過表達(dá)獲得依次由"組氨酸、Sumo標(biāo)簽、MME、內(nèi)含肽"構(gòu)成的融合蛋白,用鎳柱及透析進(jìn)行純化,在MESNa和NH₄HCO₃存在下,用DTT對內(nèi)含肽進(jìn)行自剪切,促使MME碳末端酰胺化,腸激酶切割、純化,得到碳末端酰胺化的MME。質(zhì)譜和二級串聯(lián)質(zhì)譜配合使用,檢測MME及其碳末端酰胺化�！窘Y(jié)果】通過PCR,鑒定融合蛋白,其基因片段為837 bp,符合預(yù)期。質(zhì)譜鑒定得MME相對分子量為3 057.7與其理論值3 057.64一致。二級串聯(lián)質(zhì)譜檢測得MME碳端碎片的分子量為1 214.728,與碳末端酰胺化的MME碳端碎片理論分子量1 214.739相符,匹配度為45,表明本研究制備的MME碳末端已被酰胺化,該蛋白為可溶�！窘Y(jié)論】用大腸桿菌成功地表達(dá)了重組融合... 

【文章來源】：福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2020,35(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3385901