發(fā)布時間：2021-09-05 18:57

　　【目的】探討在巰乙基磺酸鈉（MESNa）與碳酸氫銨（NH₄HCO₃）存在下,對在大腸桿菌上表達的重組融合蛋白中內(nèi)含肽（Intein）用硫醇（DTT）進行自剪切,促使抗菌肽（MME）碳末端實現(xiàn)酰胺化。【方法】構(gòu)建用大腸桿菌表達內(nèi)含肽介導的MME重組質(zhì)粒,通過表達獲得依次由"組氨酸、Sumo標簽、MME、內(nèi)含肽"構(gòu)成的融合蛋白,用鎳柱及透析進行純化,在MESNa和NH₄HCO₃存在下,用DTT對內(nèi)含肽進行自剪切,促使MME碳末端酰胺化,腸激酶切割、純化,得到碳末端酰胺化的MME。質(zhì)譜和二級串聯(lián)質(zhì)譜配合使用,檢測MME及其碳末端酰胺化�！窘Y(jié)果】通過PCR,鑒定融合蛋白,其基因片段為837 bp,符合預期。質(zhì)譜鑒定得MME相對分子量為3 057.7與其理論值3 057.64一致。二級串聯(lián)質(zhì)譜檢測得MME碳端碎片的分子量為1 214.728,與碳末端酰胺化的MME碳端碎片理論分子量1 214.739相符,匹配度為45,表明本研究制備的MME碳末端已被酰胺化,該蛋白為可溶。【結(jié)論】用大腸桿菌成功地表達了重組融合... 

【文章來源】：福建農(nóng)業(yè)學報. 2020,35(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【參考文獻】：
期刊論文
[1]具有抗腫瘤和抗菌活性的長效改性蜂毒肽（GPG）設計及其生物活性評價[J]. 葉若柏,吳珍紅,繆曉青.  中國農(nóng)學通報. 2020(16)
[2]內(nèi)含肽介導的天蠶素AD基因工程表達、其酰胺化及應用[J]. 周冠,李蕾,鄧瑋,李希平,俞超.  中國病原生物學雜志. 2016(08)
[3]抗菌肽多基因表達技術(shù)與策略[J]. 祁麗,姜寧,張愛忠,張晨雪,劉曉明,姜殿慧.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2016(15)
[4]基因工程表達產(chǎn)物的體外酰胺化加工[J]. 楊宇虹,陳虎,俞超,曾嶸,崔大敷,吳祥甫,李伯良.  生物化學與生物物理學報. 2000(03)
[5]用毛細管電泳法進行C端酰胺化結(jié)構(gòu)分析和酰胺化酶活性測定[J]. 江智紅,楊宇虹,夏其昌,李伯良,王德寶.  生物化學與生物物理學報. 1998(01)



本文編號：3385901