目的:鮑曼不動桿菌是一種非發(fā)酵革蘭陰性桿菌,廣泛分布于醫(yī)院環(huán)境,已成為醫(yī)院感染的重要條件致病菌。鮑曼不動桿菌可通過外膜囊泡（outer membrane vesicles,OMVs）與宿主細(xì)胞相互作用,誘導(dǎo)炎癥因子的產(chǎn)生,起到殺菌抑菌作用。外膜蛋白Omp33-36是一種可通過OMVs釋放的主要毒性蛋白之一,本研究旨在探討鮑曼不動桿菌外膜蛋白Omp33-36對小鼠巨噬細(xì)胞系Raw264.7的調(diào)節(jié)和在鮑曼不動桿菌感染過程中的作用。方法:（1）常規(guī)培養(yǎng)鮑曼不動桿菌ATCC 17978^T與ATCC 19606^T,差速離心法分離細(xì)菌外膜囊泡,通過SDS-PAGE凝膠電泳和考馬斯亮藍(lán)染色等方法進(jìn)行細(xì)菌外膜囊泡的鑒定。（2）將分離的外膜囊泡進(jìn)行系列稀釋,取不同濃度的外膜囊泡與小鼠巨噬細(xì)胞系Raw264.7共培養(yǎng),采用CCK-8法測定細(xì)胞生存率,以兩種標(biāo)準(zhǔn)菌株的外膜囊泡對細(xì)胞生存率影響接近的濃度確定為擬用刺激濃度。（3）以三種不同刺激濃度的外膜囊泡與小鼠巨噬細(xì)胞系Raw 264.7共培養(yǎng)24 h,測定促炎因子IL-6、TNF-α和抑炎因子IL-10、TGF-... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1兩種鮑曼不動桿菌外膜囊泡中蛋白質(zhì)含量

鮑曼不動桿菌外膜囊泡Omp33-36對巨噬細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用18*：P<0.05圖2.1兩種鮑曼不動桿菌外膜囊泡中蛋白質(zhì)含量Figure2.1ProteincontentintheoutermembranevesiclesoftwoAcinetobacterbaumannii2.4.2外膜囊泡蛋白分布情況按照步驟2.3.4所述，使用考馬斯亮藍(lán)染色檢測外膜囊泡中蛋白分布情況，結(jié)果表明，兩種標(biāo)準(zhǔn)菌株的外膜囊泡中均含有復(fù)雜的蛋白質(zhì)種類，其含量最多的是OmpA，條帶位于38kDa處，且在圖中還可以看到Omp33-36條帶。圖2.2菌株ATCC19606T與ATCC17978T外膜囊泡蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳圖Figure2.2SDS-PAGEelectrophoresisofoutermembranevesicleproteinsofstandardstrainsofAcinetobacterbaumanniiATCC19606TandATCC17978TM：蛋白質(zhì)Marker1：ATCC19606的OMVs2：ATCC17978的OMVs2.4.3CCK-8法分析外膜囊泡對巨噬細(xì)胞RAW264.7生存率的影響按照2.3.6中所述步驟，使用CCK-8法分析不同鮑曼不動桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株所產(chǎn)

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文19生的的外膜囊泡對巨噬細(xì)胞RAW264.7的細(xì)胞生存率的影響。結(jié)果顯示：兩種標(biāo)準(zhǔn)菌株的外膜囊泡對巨噬細(xì)胞RAW264.7的細(xì)胞毒性作用并不很強(qiáng)，即使當(dāng)外膜囊泡濃度達(dá)到50μg/mL,巨噬細(xì)胞的生存率也保持在80%左右，當(dāng)外膜囊泡濃度高于15μg/mL后，兩種標(biāo)準(zhǔn)菌株的外膜囊泡對細(xì)胞生存率的影響趨于相似，因此在本課題的后續(xù)試驗(yàn)中，考慮選擇15μg/mL,20μg/mL,25μg/mL作為外膜囊泡的刺激濃度。圖2.3外膜囊泡刺激巨噬細(xì)胞Raw264.7的生存率Figure2.3ThesurvivalrateofmacrophagesRaw264.7stimulatedbyadventitialvesicles2.4.4外膜囊泡刺激后的巨噬細(xì)胞RAW264.7相關(guān)細(xì)胞因子mRNA的檢測結(jié)果按照2.3.7的實(shí)驗(yàn)步驟，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測兩標(biāo)準(zhǔn)菌株外膜囊泡處理后巨噬細(xì)胞Raw264.7相關(guān)細(xì)胞因子mRNA水平的表達(dá)情況，結(jié)果表明：兩種標(biāo)準(zhǔn)菌株外膜囊泡處理巨噬細(xì)胞Raw264.724h后，促炎因子TNF-α、IL-6的表達(dá)水平明顯增高；且抑炎因子IL-10、TGF-βATCC17978T外膜囊泡處理組表達(dá)水平均有明顯增高但ATCC19606T外膜囊泡處理組表達(dá)水平則呈下調(diào)趨勢。綜上分析，兩種外膜囊泡處理的巨噬細(xì)胞均呈現(xiàn)顯著的促炎作用，而抑炎因子的表達(dá)主要表現(xiàn)在ATCC17978T外膜囊泡刺激的巨噬細(xì)胞。這有可能正是細(xì)菌自我保護(hù)逃避免疫清除的一種機(jī)制，且不同菌株因其分泌的外膜囊泡承載的成分差異，這種逃避宿主防御的能力不盡相同。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3379408