生淀粉酶可以在淀粉糊化溫度以下的溫度下直接降解生淀粉,具有巨大應(yīng)用價(jià)值。絲狀真菌生淀粉酶的產(chǎn)生受轉(zhuǎn)錄因子的嚴(yán)格調(diào)控。但是,草酸青霉（Penicillium oxalicum）中生淀粉酶產(chǎn)生的調(diào)控機(jī)制仍不清楚。前期工作中,通過(guò)比較基因組學(xué)獲得了草酸青霉HP7-1中調(diào)控生淀粉酶產(chǎn)量的候選調(diào)控基因集。本研究以草酸青霉ΔPoxKu70為出發(fā)菌株,用同源重組技術(shù)敲除了其中一個(gè)候選調(diào)控基因POX03446,獲得了缺失突變株ΔPOX03446。在可溶性淀粉培養(yǎng)條件下,與出發(fā)菌株ΔPoxKu70相比,轉(zhuǎn)接后第2天,ΔPOX03446的生淀粉酶產(chǎn)量顯著下降29.8%～40.3%（p<0.01;Student’s t test）;轉(zhuǎn)接后第4天,生淀粉酶產(chǎn)量顯著下降14.6%～29.7%（p<0.01;Student’s t test）,表明基因POX03446正向調(diào)控草酸青霉生淀粉酶的產(chǎn)生。NCBI BlastP比對(duì)分析顯示POX03446與草酸青霉調(diào)控木聚糖酶基因和纖維素酶基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子PoXlnR一致性為46%。這是第一次報(bào)道POX03446調(diào)控草酸青霉生淀粉酶的產(chǎn)生。 

【文章來(lái)源】：基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2020,39(01)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

草酸青霉基因POX03446敲除盒的構(gòu)建

將出發(fā)菌株ΔPoxKu70，缺失突變株3個(gè)轉(zhuǎn)化子ΔPOX03446-3、ΔPOX03446-6和ΔPOX03446-8新鮮孢子懸液直接接種到可溶性淀粉培養(yǎng)基中，28℃、180 r/min培養(yǎng)6 d。分別測(cè)定非轉(zhuǎn)接條件下第4天和第6天的生淀粉酶產(chǎn)量。與ΔPoxKu70相比，淀粉誘導(dǎo)第4天，突變株ΔPOX03446-3、ΔPOX03446-6和ΔPOX03446-8的生淀粉酶產(chǎn)量分別下降了(37.59±5.36)%、(43.47±4.76)%和(27.52±4.28)%；淀粉誘導(dǎo)第6天，突變株ΔPOX03446-3、ΔPOX03446-6和ΔPOX-03446-8的生淀粉酶產(chǎn)量分別下降了(12.53±1.09)%、(20.45±1.52)%和(5.59±2.35)%(圖3)。結(jié)果表明，基因POX03446在淀粉誘導(dǎo)前期對(duì)生淀粉酶產(chǎn)量起主要調(diào)控作用。1.4 草酸青霉缺失突變株ΔPOX03446在轉(zhuǎn)接條件下的生淀粉酶產(chǎn)量的測(cè)定

基因POX03446編碼一個(gè)含有846個(gè)氨基酸的多肽，將POX03446的氨基酸序列進(jìn)行NCBI BlastP和SMART比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)POX03446含有GAL4DNA結(jié)合域和Fungal＿TF＿M(jìn)HR結(jié)構(gòu)域(圖5)。POX03446的氨基酸序列與草酸青霉114-2中PDE＿04461(EPS29511.1)的氨基酸序列一致性最高，達(dá)到100%。蛋白序列比對(duì)顯示，POX03446與草酸青霉調(diào)控木聚糖酶基因和纖維素酶基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子PoXlnR序列一致性為46%。圖4 草酸青霉缺失突變株ΔPOX03446和ΔPox Ku70在轉(zhuǎn)接條件下生淀粉酶產(chǎn)量的檢測(cè)


本文編號(hào)：3373530