背景:間充質(zhì)干細胞源性外泌體因其眾多優(yōu)點被應(yīng)用于多種疾病的診斷與治療,因此精確有效以及低成本檢測出間充質(zhì)干細胞源性外泌體對將來疾病的診斷和治療至關(guān)重要。目的:對間充質(zhì)干細胞源性外泌體檢測方法以及最新進展做一介紹。方法:檢索萬方、百度學(xué)術(shù)、維普、CNKI、PubMed、Web of Science、Sinomed、Embase、Cochrane、Web of Knowledge等數(shù)據(jù)庫1997年6月至2019年6月期間關(guān)于間充質(zhì)干細胞源性外泌體檢測方法的文獻,檢索詞分別為"間充質(zhì)干細胞""外泌體""檢測方法"和"mesenchymal stem cells""exosomes""detection methods"。排除重復(fù)與相關(guān)性弱的文獻,將檢索到的文獻進行整理,共納入60篇文獻來進行分析。結(jié)果與結(jié)論:①總結(jié)了間充質(zhì)干細胞的定義、生物學(xué)特性及其旁分泌作用;②總結(jié)了間充質(zhì)干細胞源性外泌體的定義、生物學(xué)特性及其在臨床治療中較好的應(yīng)用前景,例如調(diào)節(jié)機體免疫功能、促進受損組織再生等;③總結(jié)了目前對間充質(zhì)干細胞源性外泌體常用的檢測方法以及最新研究進展;④上述研究為臨床應(yīng)用間充質(zhì)干細胞源性外泌體治... 

【文章來源】：中國組織工程研究. 2020,24(13)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

外泌體的檢測方法[15]

外泌體作為細胞間信息交流的重要介質(zhì)，在組織修復(fù)、免疫等領(lǐng)域發(fā)揮獨特的生物學(xué)功能，具有廣闊的研究和應(yīng)用前景。如何高效、高純度地分離外泌體是實現(xiàn)其組學(xué)分析和功能研究的關(guān)鍵。實際上除了不同來源細胞分泌的外泌體存在異質(zhì)性之外，同種細胞來源的外泌體也有可能大小形態(tài)各異。外泌體的體積小、密度低、分離難度大，而且不同分離方法得到的外泌體理化性質(zhì)不同，這導(dǎo)致了外泌體研究存在大量不可控性和難重復(fù)性。如今已經(jīng)開發(fā)了許多基于外泌體物理及生物化學(xué)性質(zhì)的分離技術(shù)，如超速離心法、密度梯度離心法、超濾法以及目前比較成熟的商用化試劑盒等。超速離心法是目前外泌體分離的“金標(biāo)準”，也是使用最廣泛的方法。超速離心法工作原理：基于外泌體的大小，大的較早沉淀在管底，而小的需更大的離心力才能沉淀�？扇苄越M分不受離心影響，但是非外泌體顆粒如脂蛋白和蛋白質(zhì)聚集體可能會一同沉淀[20]。超速離心法的缺點在于儀器昂貴、耗時費力、產(chǎn)量低且重復(fù)離心操作可能對外泌體造成破壞。密度梯度離心法分離原理：基于外泌體的密度，可從不同密度的顆粒分離出外泌體，外泌體移動至其平衡密度，而高密度的可溶性組分將在管底沉淀[20]。密度梯度離心法獲得的外泌體純度較高，但是步驟繁瑣且耗時。超濾法則是利用不同截留相對分子質(zhì)量的超濾膜對樣品進行選擇性分離，可溶性蛋白質(zhì)和小于臨界值(約105 kD)的顆粒被推向過濾膜，然后在過濾膜處收集外泌體[20]。雖然超濾法簡單高效，但超濾過膜時加壓可引起外泌體變形或破壞且可能受蛋白污染。目前用得較多的商用化試劑盒是Exo Quick試劑盒和Isolation試劑盒，這2種試劑盒都是基于沉淀法原理來分離外泌體。Exo Quick試劑盒是通過一種螯合物對外泌體進行捕捉，Isolation試劑盒是通過將水分子聚合到一起，強行減少可溶性成分，使其從溶液中析出，之后經(jīng)過低速離心即可收集外泌體[21]。雖然商用化試劑盒分離外泌體速度快、產(chǎn)量高，但是價格較昂貴且有一定的細胞毒性。目前分離外泌體的方法眾多，但是還沒有同時滿足外泌體高濃度及高產(chǎn)量的方法，這將影響后續(xù)準確高效地檢測外泌體的物理及生物化學(xué)性質(zhì)。

【參考文獻】：
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