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微米管表面的CHA放大-競爭抑制策略用于區(qū)分單堿基突變

發(fā)布時間:2021-08-18 00:09
  作為遺傳信息的主要載體,DNA在生命系統(tǒng)中具有重要的傳遞信息作用,目前有等溫擴增、微陣列、熒光雜交核酸探針、聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)等方法可以檢測樣品中DNA的種類及含量。由于物理和基因疾病的影響,人類DNA序列會發(fā)生各種各樣的變異導(dǎo)致基因分型,DNA或RNA序列中單堿基變異可能導(dǎo)致嚴重的生理后果,因此開發(fā)新的檢測手段用于區(qū)分單核苷酸水平上的DNA序列就變得十分重要。我們合理地設(shè)計雜交探針,提高雜交探針選擇性識別SNV的能力。一個理想的探針可以只與目標鏈雜交,而不與突變鏈雜交,為了構(gòu)建這種程序化的催化信號放大體系,我們在微米管波導(dǎo)檢測平臺的基礎(chǔ)上,將催化harpin探針自組裝體系(CHA)與競爭抑制體系結(jié)合,對let-7家族中的let-7a、let-7c、let-7e、let-7f進行區(qū)分。我們證明了在這種復(fù)合體系下miRNA與探針選擇性雜交的效率高于單一體系,區(qū)分因子提高了10倍左右,檢測極限低至15fM。最后,我們使用該體系對胰腺癌、肺癌、卵巢癌和胃癌患者的血清進行直接檢測,實驗結(jié)果表明放大-競爭體系的微米管平臺可以靈敏的區(qū)分出健康人與病人的血清,并且可以對患者類型進行初步診斷分析... 

【文章來源】:中國科學技術(shù)大學安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】:67 頁

【學位級別】:碩士

【部分圖文】:

微米管表面的CHA放大-競爭抑制策略用于區(qū)分單堿基突變


圖1.1?SYBR?Green染料插入雙鏈DNA??

探針法,目標分子


圖1.2?TaqMan探針法??

環(huán)擴,放大原理,引物


3丨丨丨丨丨11丨丨丨丨丨1丨丨山?丨"丨!丨1丨丨丨。⒇椋。椋。樨┴??圖1.2?TaqMan探針法??1.3.1.2鏈置換放大(SDA)??在生物體中,堿基切除修復(fù)是通過切開受損磷酸二酯鍵完成的,缺失的部分??由DNA聚合酶重新合成,DNA連接酶密封切口。SDA利用這一反應(yīng)過程,使??PCR擴增反應(yīng)可以在恒溫下進行;玖鞒虨椋阂铮痹冢怠擞幸粋突起,用??于識別Hindi核酸外切酶;引物2用來連接引物1的兩端。每一個熱變形的ssDNA??模板都會連接2個不同的引物,引物1在EschericiacoliDNA聚合酶的作用下向??著HincII核酸外切酶的識別位點延伸,同時引物2聚合取代引物1端起始的新??鏈,取代的鏈在下一輪循環(huán)中作為模板。第二輪循環(huán)中,在Hindi識別序列兩端??產(chǎn)生的雙鏈1C分子,最終合為一體。核酸外切酶繼續(xù)剪切末端,exo_?Klenow引??發(fā)聚合


本文編號:3348788

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