該研究以酵母破壁酶、蝸牛酶破碎釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）細(xì)胞壁,再使用總核糖核酸（RNA）提取試劑（TRIzol）法提取酵母總RNA,通過對總RNA進(jìn)行濃度與純度的分析,比較酶處理對RNA提取的影響。結(jié)果表明,酵母破壁酶的最佳提取條件為加酶量37.5μL,提取溫度27℃,提取時間15 min。在此最佳提取條件下,提取RNA質(zhì)量濃度為1 079.05 ng/μL,A_{260 nm}/A_{280 nm}為2.10,A_{260 nm}/A_{230 nm}為2.15;蝸牛酶的最佳提取條件為加酶量30 mg/mL,提取溫度37℃,提取時間30 min。在此最佳提取條件下,提取RNA質(zhì)量濃度為1 673.39 ng/μL,A_{260 nm}/A_{280 nm}為1.99,A_{260 nm}/A_{230 nm}為1.81。結(jié)果顯示,酵母破壁酶的提取效果優(yōu)于蝸牛酶。 

【文章來源】：中國釀造. 2020,39(12)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

不同提取溫度提取酵母總RNA電泳圖

根據(jù)酵母破壁酶說明書，酵母破壁酶的最佳溫育時間為1～2 h，而在預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)當(dāng)設(shè)置為45 min～2 h時，RNA濃度變化不大，但隨著時間的延長，RNA降解嚴(yán)重。因此，適當(dāng)調(diào)整溫育時間為15～75 min。從表2可以看出，經(jīng)酵母破壁酶處理后，不同酶處理時間下提取的RNA濃度均很高，在1 500 ng/μL以上，A260 nm/A280 nm和A260 nm/A230 nm均在2.0左右，說明基本無蛋白質(zhì)或其他鹽類等雜質(zhì)污染。綜合圖2，泳道1,2,3均有亮度較高，條帶較好的28S r RNA和18S r RNA條帶，而泳道4,5可能由于酶處理時間太長，RNA降解，從而導(dǎo)致電泳圖中幾乎無條帶出現(xiàn)。由于延長酶處理時間可能會使RNA降解，綜合圖3和表2，當(dāng)酵母破壁酶處理15 min時RNA濃度和純度均很高，因此，酵母破壁酶的最適提取時間為15 min。根據(jù)蝸牛酶的說明書，蝸牛酶溫育1 h即可溶解酵母細(xì)胞壁，因此，設(shè)置蝸牛酶的溫育時間為30～90 min。由表2可以看出，蝸牛酶處理后的核酸濃度很高，當(dāng)提取時間>45 min時，核酸質(zhì)量濃度在2 000 ng/μL以上，但A260 nm/A280 nm和A260 nm/A230 nm卻不理想，均在2.0以下，說明有蛋白質(zhì)或其他鹽類等雜質(zhì)污染，導(dǎo)致泳道7～10只有5S r RNA條帶。當(dāng)蝸牛酶的處理時間為30 min時，雖然核酸濃度相對較小，為1 108.209 ng/μL，但泳道6有28S r RNA和18S r RNA條帶，只不過條帶中伴隨有小片段RNA的彌散帶，可能是由于A260 nm/A230 nm在2.0以下，有其他裂解液雜質(zhì)的殘留造成的。綜合圖3和表2，蝸牛酶的最適提取時間為30 min。

為探究釀酒酵母GGSF16的生長情況，選取最佳的接種時間，使用分光光度計(jì)測定樣品在波長600 nm處的吸光度值，結(jié)果見圖1。由圖1可以看出，釀酒酵母GGSF16在6～16 h處于對數(shù)生長期，選取10 h的菌體進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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