秀麗隱桿線蟲(chóng)是一種重要的模式生物,已廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)和植物方面的研究,但線蟲(chóng)體態(tài)微小,常規(guī)方法難以實(shí)現(xiàn)對(duì)單條線蟲(chóng)的精準(zhǔn)操控和長(zhǎng)期追蹤。本研究基于微流體控制技術(shù),設(shè)計(jì)了培養(yǎng)池陣列微流控芯片,提出一種單線蟲(chóng)并行分離方法。通過(guò)考察液體培養(yǎng)時(shí)的線蟲(chóng)密度、線蟲(chóng)體寬及其分布等影響因素,分析在芯片上進(jìn)行單線蟲(chóng)并行分離的條件。結(jié)果顯示,采用無(wú)菌液體培養(yǎng)時(shí),線蟲(chóng)密度對(duì)線蟲(chóng)體寬及其分布具有明顯影響,高密度（約700條/mL）培養(yǎng)組和低密度（約300條/mL）培養(yǎng)組的線蟲(chóng)體寬分別為（35.5±5.2）μm和（40.0±1.8）μm,且低密度下培養(yǎng)的線蟲(chóng)可獲得較好的芯片分離效果,所得含線蟲(chóng)與含單線蟲(chóng)培養(yǎng)池的比例分別為83.3%和66.7%。該并行分離方法相對(duì)簡(jiǎn)便、可靠,結(jié)合其微流控芯片結(jié)構(gòu)和流體控制方式,有望用于自動(dòng)化單線蟲(chóng)長(zhǎng)期培養(yǎng)和觀測(cè)研究。 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2020,29(12)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

培養(yǎng)池陣列微流控芯片結(jié)構(gòu)示意圖

使用3個(gè)注射泵(TJ-2A/ L0107-2A,保定蘭格恒流泵有限公司)和聚四氟乙烯(PTFE)塑料管，進(jìn)行微流控芯片上的流體控制(圖2),可準(zhǔn)確設(shè)定流速和體積等參數(shù)。線蟲(chóng)經(jīng)同步化處理后，在CeMM液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)6～7 d, 在顯微鏡下觀察并測(cè)量部分線蟲(chóng)的體寬。當(dāng)測(cè)量的線蟲(chóng)樣品大部分(>70%)體寬超過(guò)35 μm時(shí)，取線蟲(chóng)懸浮液，清洗掉雜質(zhì)后，調(diào)整線蟲(chóng)密度約為2000～3 000條/mL,備用。

分別采用高密度和低密度下培養(yǎng)的線蟲(chóng)樣品，將其稀釋至合適的密度后，每次取20～30條線蟲(chóng)進(jìn)行芯片上的分離試驗(yàn)，每種樣品重復(fù)3次。試驗(yàn)過(guò)程中，分別記錄加樣與捕獲階段和清除多余線蟲(chóng)階段每個(gè)捕獲通道處的線蟲(chóng)數(shù)，以及進(jìn)樣與分離階段每個(gè)培養(yǎng)池中的線蟲(chóng)數(shù)，并采集相應(yīng)圖像(圖4)。圖5為高密度與低密度下培養(yǎng)的線蟲(chóng)樣品在芯片上分離的結(jié)果。經(jīng)統(tǒng)計(jì)可知，采用兩種不同的樣品時(shí)，在加樣與捕獲階段，含有線蟲(chóng)的捕獲通道的數(shù)量分別為6.3±0.6和8±0,且兩種樣品間存在顯著性差異；在清除多余線蟲(chóng)階段，含有線蟲(chóng)的捕獲通道的數(shù)量分別為5±1和7.3±1.2,統(tǒng)計(jì)分析顯示兩種樣品間不存在顯著性差異；在進(jìn)樣與分離階段，含有線蟲(chóng)的培養(yǎng)池的數(shù)量分別為4.3±0.6和6.7±0.6,且兩種樣品間存在極顯著性差異，表明線蟲(chóng)體寬及其分布對(duì)芯片上的線蟲(chóng)分離有明顯影響，具體分析如下。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]園藝線蟲(chóng)農(nóng)業(yè)無(wú)害化防治措施[J]. 薛玉華.  農(nóng)化新世紀(jì). 2006(04)



本文編號(hào)：3346898