共軛亞油酸（Conjugated Linoleic Acid,CLA）是一類具有不同位置和幾何異構(gòu)體的十八碳二烯酸的總稱。CLA因結(jié)構(gòu)多樣而具有不同的生理功能,目前研究較多的活性異構(gòu)體為c9,t11-CLA和t10,c12-CLA。生物合成法利用亞油酸異構(gòu)酶催化LA生成不同類型的CLA,因其產(chǎn)物結(jié)構(gòu)單一、安全性更高而受到研究人員的青睞,但是亞油酸異構(gòu)酶催化能力仍有待提高。本研究以發(fā)酵乳中分離的植物乳桿菌和市售痤瘡丙酸桿菌基因組為模板,克隆表達(dá)植物乳桿菌的肌球蛋白交叉反應(yīng)抗原基因（Myosin-Cross-Reactive Antigen,mcra）和痤瘡丙酸桿菌亞油酸異構(gòu)酶基因（linoleic acid isomerase gene,lai）,利用易錯(cuò)PCR突變兩種基因,獲得吸光度值和CLA產(chǎn)量可能提高的菌株,通過流式細(xì)胞術(shù)篩選攜帶綠色熒光蛋白標(biāo)簽的重組菌,快速得到正突變子,對(duì)部分提高顯著的突變株測(cè)序,分析突變前后的亞油酸異構(gòu)酶基因,探究差異位點(diǎn)對(duì)產(chǎn)量的影響。從五份內(nèi)蒙古傳統(tǒng)發(fā)酵乳中篩選鑒定到10菌株,選擇CLA產(chǎn)量較高的植物乳桿菌HAC01,測(cè)定其發(fā)酵性能,利用均勻設(shè)計(jì)優(yōu)化發(fā)酵條件... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

c9，t11-CLA和t10，c12-CLA結(jié)構(gòu)圖

沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文17圖2-1CLA標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2-1CLAstandardcurve2.3.4基因組提取用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取已篩選的乳酸菌基因組，試劑盒中提供的溶液有：蛋白酶K、BufferGL、BufferGW1、BufferGW2、洗脫緩沖液GE，需自備溶菌酶溶液。具體操作見附錄一，提取后用超微量核酸蛋白定量?jī)x測(cè)定提取物的DNA濃度。用0.8％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果，以DL2000作為DNAMarker。2.3.5PCR擴(kuò)增稀釋基因組DNA至終濃度為20ng/μL，以此為模板，用16S引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系見表2-2，反應(yīng)程序見表2-3，用1％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，以DL2000作為DNAMarker，PCR結(jié)果驗(yàn)證成功送交上海派森諾生物科技股份有限公司測(cè)序。表2-2PCR體系Table2-2PCRsystem體系組分反應(yīng)體系（μL）組分終濃度反應(yīng)體系（μL）組分終濃度2×EsTaqMasterMix(Dye)模板DNA（20ng/μL）55×255×12ng/μL52ng/μL上游引物（1pmol/μL）10.1pmol/μL50.1pmol/μL下游引物（1pmol/μL）10.1pmol/μL50.1pmol/μLddH2O2-10-總體積5-50

6S鑒定Fig.2-216Sidentification

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]t10,c12-共軛亞油酸的特異性生物合成及其對(duì)SD大鼠乳腺腫瘤的抑制作用[D]. 張凱強(qiáng).南昌大學(xué) 2019
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[4]亞油酸異構(gòu)酶在原核生物中的異源表達(dá)[D]. 黃昕畑.江南大學(xué) 2018
[5]植物乳桿菌P-8亞油酸異構(gòu)酶酶學(xué)性質(zhì)及必需基團(tuán)的研究[D]. 趙黎黎.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[6]基于GC-MS的微生物代謝組學(xué)在植物乳桿菌生物轉(zhuǎn)化共軛亞油酸中的應(yīng)用[D]. 陶瑞.江南大學(xué) 2017
[7]重組亞油酸異構(gòu)酶在乳酸克魯維酵母中表達(dá)條件的優(yōu)化及微囊化[D]. 李晨曦.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[8]內(nèi)蒙傳統(tǒng)發(fā)酵奶油制品中CLA產(chǎn)生菌的篩選及發(fā)酵條件優(yōu)化[D]. 劉春曉.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[9]生物催化法合成反10,順12-共軛亞油酸的研究[D]. 宋宇航.江南大學(xué) 2016
[10]通過定向進(jìn)化和半理性設(shè)計(jì)提高順式環(huán)氧琥珀酸水解酶的熱穩(wěn)定性的研究[D]. 喬沛.浙江大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3340706