雞傳染性貧血病毒（Chicken infectious anemia virus,CIAV）是一種臨床上能夠引起雛雞再生障礙性貧血和全身淋巴組織萎縮為主要特征的雞傳染性貧血（Chicken infectious anemia,CIA）的病原體。CIAV會攻擊雞的免疫系統(tǒng),不僅會引起其他病原繼發(fā)感染,還會干擾重大疫病的免疫效果。該病可垂直傳播,通過對種雞進(jìn)行抗體監(jiān)測,及時發(fā)現(xiàn)并淘汰患病種雞對于該病的防控至關(guān)重要。國外的商品化CIAV ELISA抗體檢測試劑盒,價格昂貴,用于該病的抗體檢測成本太高,而國內(nèi)還沒有相關(guān)的商品化檢測產(chǎn)品。因此,本論文以CIAV的衣殼蛋白VP1為抗原,建立了一個特異性、敏感性、重復(fù)性較好的CIAV間接ELISA抗體檢測方法,希望能夠為CIAV的抗體檢測和疫病凈化提供一個重要工具。主要研究內(nèi)容如下:1、利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)重組VP1蛋白將構(gòu)建好的含有VP1基因的轉(zhuǎn)移質(zhì)粒和桿狀病毒基因組共轉(zhuǎn)染sf 9細(xì)胞,以產(chǎn)生攜帶有VP1基因的重組桿狀病毒,命名為BAC-VP1。通過光學(xué)顯微鏡可以觀察到轉(zhuǎn)染細(xì)胞相較于正常細(xì)胞而言,細(xì)胞體積變大,膨脹,初步判斷細(xì)胞轉(zhuǎn)染后形成了重組... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

雞傳染性貧血病毒（CIAV）的電鏡圖片(Gelderblometal1989)

雞傳染性貧血病毒衣殼蛋白的重組表達(dá)及其間接ELISA方法的建立3圖1-2CIAV的基因組模式圖圖1-2CIAVgenomemodelmap1.1.3流行病學(xué)1979年，CIAV在日本首次報道后，便一直存在于日本的商業(yè)雞群中，始終難以得到凈化和根除(Yuasaetal1985)。目前，CIAV在世界范圍內(nèi)廣泛存在(Pope1991)。英國(McNultyetal1988)、瑞典(Engstrom1988)、南非(WichtandMaharaj1993)、印度(Natesanetal2006)、澳大利亞(McNultyetal1989)、美國(Lucioetal1990)、巴西(Brentanoetal1991)、阿根廷(Buscagliaetal1994)、墨西哥(Ledesmaetal2001)等國都有發(fā)現(xiàn)并分離的報道。1992年，我國崔現(xiàn)蘭等人從哈爾濱肉雞場中首次分離出該病毒(崔現(xiàn)蘭etal1992)。我國山東、湖南、安徽、甘肅等多個省市地區(qū)均有該病的報道(Eltahiretal2011)。一項國內(nèi)家禽疾病調(diào)查顯示，中國五個省的農(nóng)場中CIAV血清陽性率高達(dá)42％(Zhouetal1997)，2016-2017年廣東省的CIAV陽性率達(dá)到了32.8%(Tanetal2020)。此外，在中國東南部的活禽市場上，該病毒的流行率高達(dá)87％(Ducatezetal2008)。CIAV容易與其他病原體混合感染，包括馬立克氏病病毒（MDV），網(wǎng)狀內(nèi)皮病病毒（REV），禽白血病病毒（ALV），禽回旋病毒2（AGV2）和禽呼長孤病毒（ARV），并且混合感染是CIAV的主要感染類型(Yaoetal2019)。CIAV的自然宿主主要是雞，不同年齡的雞對CIAV均易感，但是以雛雞感染率最高，尤其是1日齡的雛雞。隨著免疫器官的發(fā)育成熟，1-3周齡的雞對該病引起貧血的易感性會逐漸降低(Goryoetal1985)。CIAV主要通過水平傳播和垂直傳播途徑造成病毒的傳染和擴(kuò)大(YuasaandYoshida1983)，CIAV的垂直傳播可能僅限于感染后相對較短的時期(Yuasaetal1983)，糞-口途徑可能是水平傳播的主要方式(Yuasaet

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆碩士研究生學(xué)位（畢業(yè)）論文83材料和方法3.1實(shí)驗材料3.1.1細(xì)胞、質(zhì)粒、菌株、VP1基因Sf9昆蟲細(xì)胞由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)錢平老師課題組饋贈；pOET5-EGFP質(zhì)粒、pOET5-VP1質(zhì)粒、pET-11a-VP2質(zhì)粒、pET-28a(+)載體，均由本實(shí)驗室保存；dnaK-danJ-grpE/groES-groEL、groES-groEL、dnaK-danJ-grpE、groES-groEL-tig、dnaK-danJ-grpE/groES-groEL-tig共5種分子伴侶蛋白的表達(dá)質(zhì)粒，均由本實(shí)驗室保存；大腸桿菌BL21(DE3)和DH5α菌株，均由本實(shí)驗室保存；以實(shí)驗室前期分離的雞傳染性貧血病毒毒株的基因序列為基礎(chǔ)，對VP1基因的N端截短120bp，送由天一輝遠(yuǎn)（武漢）生物科技有限公司進(jìn)行大腸桿菌密碼子優(yōu)化后合成，合成的基因片段連接pET-28a載體，命名為pET-28a-VP1（40~499aa）。pET-28a(+)和pOET5的質(zhì)粒圖譜如圖3-1所示。圖3-1質(zhì)粒圖譜Fig.3-1Plasmidmapinthestudy

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]禽弱毒疫苗中雞傳染性貧血病病毒nested-PCR檢測方法的建立[J]. 李曉晗,房立春,李陽,崔治中,常爽,趙鵬.  中國家禽. 2017(10)
[2]雞貧血病毒Taq Man探針熒光定量PCR檢測方法的建立[J]. 宋修慶,高宏雷,王曉艷,林歡,宇文延青,王永強(qiáng),王笑梅.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2009(01)
[3]雞傳染性貧血病病毒的鑒定[J]. 崔現(xiàn)蘭,幸桂香,吳東來,馮菊艷,李鋒,曲立新.  中國畜禽傳染病. 1992(06)



本文編號：3325943