目的:本實(shí)驗(yàn)采用腺相關(guān)病毒（adeno-associated virus2/9-green fluorescence Protein,AAV2/9-GFP）通過自制微量注射系統(tǒng)注射到大鼠丘腦束旁核（Parafascicular nucleus,PF）或背外側(cè)紋狀體（dorsolateral striatum,DLS）經(jīng)注射不同的劑量和不同的轉(zhuǎn)染周數(shù),觀察病毒轉(zhuǎn)染及在丘腦束旁核-紋狀體通路投射情況,找出示蹤試劑的最佳劑量及其轉(zhuǎn)染時(shí)間。同時(shí)觀察轉(zhuǎn)染病毒對(duì)組織的影響。方法:wistar雄性大鼠77只,體重280-320g,實(shí)驗(yàn)前經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)確認(rèn)無異常行為。根據(jù)是否注射病毒將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為2組,分別為接種病毒的實(shí)驗(yàn)組（n=72只）和對(duì)照組（n=5只）。運(yùn)用腦立體定位技術(shù)在DLS和PF注射不同劑量的示蹤劑AAV2/9-GFP,經(jīng)過不同轉(zhuǎn)染時(shí)間后進(jìn)行灌流取腦,將腦組織進(jìn)行冰凍切片,最終得到尼氏染色的腦片標(biāo)本。在激光共聚焦熒光顯微鏡下觀察神經(jīng)和腦組織,組織學(xué)位點(diǎn)鑒定。通過Image-Pro Plus6.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,優(yōu)化參數(shù):示蹤劑平均光密度、細(xì)胞平均周長、細(xì)胞平均面積、示蹤劑注射最佳作用時(shí)... 

【文章來源】：山東師范大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

微量注射系統(tǒng)

注射手術(shù)

圖 2.1 病毒注射至 DLS 及位點(diǎn)鑒定DLS 投射情況：病毒注射至 DLS 部位時(shí)，可以投射至皮層、底丘腦核。如圖 3.2，3.3，3.4 所示。圖 2.2 病毒注射至 DLS 部及放大圖


本文編號(hào)：3320164