屎腸球菌WEFA23表面蛋白拮抗單核增生李斯特菌內化定植及其敲除株構建的研究
發(fā)布時間：2021-07-28 17:37
乳酸菌是益生菌的重要成員,具有促進營養(yǎng)吸收、拮抗致病菌黏附定植、增強宿主免疫力和維持腸道穩(wěn)態(tài)等重要生理功能。黏附定植于腸上皮細胞是乳酸菌發(fā)揮益生功能的基礎,亦是拮抗致病菌內化、定植腸道的前提。目前,乳酸菌功能性組分及其作用分子機制研究甚少。乳酸菌的表面蛋白是其與外界直接接觸的物質,具有抑制致病菌內化定植、調節(jié)宿主免疫等多種生理特性。因此,闡明乳酸菌表面蛋白在拮抗致病菌黏附、內化和定植的內在機制,將為豐富挖掘益生菌表面蛋白在調節(jié)胃腸道微生態(tài)及其機體免疫作用,提供重要科學依據。本文借助細胞和動物模型,較為系統(tǒng)地探究了屎腸球菌WEFA23表面蛋白拮抗單核增生李斯特菌內化定植分子機制,并借助分子生物學手段構建其表面蛋白主要成分鳥氨酸氨甲酰基轉移酶（ornithine carbamoyltransferase,OTC）基因缺陷株,為功能實驗驗證提供基礎材料。第一章緒論部分在闡述乳酸菌表面蛋白、單核增生李斯特菌以及基因重組技術的基礎上,對腸球菌拮抗單核增生李斯特菌的研究動態(tài)進行了簡述,對屎腸球菌WEFA23的表面蛋白拮抗單核增生李斯特菌的內化定植分子機制進行了展望。第二章探究了屎腸球菌WEFA23...
【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校
【文章頁數】：76 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
圖２．２表面蛋白抑制單核增生李斯特菌內化Ｃａｃｏ－２細胞作用；圖中沒有共同字母的組別顯??著不同，尸＜０．０５??
第二章屎腸球菌ＷＥＦＡ２３表面蛋白抑制單核增生李斯特菌內化腸上皮細胞機制??２．４實驗結果??２．４．１表面蛋白對Ｃａｃｏ－２細胞增殖活性影響??以Ｃａｃｏ－２細胞為模型，ＳＬＰ為研究對象，利用ＣＣＫ－８法檢測細胞的增殖活??性。不同濃度的ＳＬＰ作用于Ｃａｃｏ－２細胞后増殖效果如圖２．１所示。結果表明２５－??８００?ｐｇ／ｍＬ?ＳＬＰ對Ｃａｃｏ－２細胞增殖均無顯著影響，表明ＳＬＰ對Ｃａｃｏ－２細胞無毒??性。選用５０、１００和２０〇ｎｇ／ｍＬ的ＳＬＰ進行后續(xù)實驗。??１５０－??ｉ：ｉｌｌｌ??０?２５?５０?１００?２００?４００?８００??ＣＯＮＣＥＮＴＲＡＴＩＯＮ?（＾ｇ／ｍＬ）??圖２．１不同濃度表面蛋白對Ｃａｃｏ－２細胞增殖的影響??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ＳＬＰ?ｏｎ?Ｃａｃｏ－２?ｃｅｌｌｓ?ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．??２．４．２表面蛋白抑制單核增生李斯特菌內化Ｃａｃｏ－２細胞??為了研究ＳＬＰ對內化Ｃａｃｏ－２細胞的影響，采用競爭、排斥和替換實驗??進行檢測。結果如圖２．２所示，ＳＬＰ僅在排斥實驗中顯著拮抗內化Ｃａｃｏ－２細??胞，減少胞內單核增生李斯特菌數量（尸＜０．０５）。??虧６１??彡??—聞上?—險?ｈ?二?ｊ！ｊ?＾２?Ｃｏｎｔｒｏｌ??Ｓ?４■目圈■?蘭聞?＿?＝?：；：?Ｈ?Ｓ?Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ?ａｓｓａｙ??Ｔ?三?ｒａ?■?三尚■?＝?Ｈ?ＫＢｉ?Ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ?ａｓｓａｙ??§?＝?ｍ?Ｈ?三會：■■?Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ?ａｓｓａｙ??�。誓_丨ｉｉ，Ｕ?ｋｉ，＿＿??５０?＾ｉｇ
圖２．４單核增生李斯特菌相關毒力因子轉錄水平變化；??（Ａ）?ｉｎｉ?Ａ＼?ｉＢ）?ｉｎｉ?Ｂ；?ＣＣ）?ａｃｔ?Ａ；?（Ｄ）?ｐｒｆＡ＼?（Ｅ）?ｐｉｃ?Ａ；?（Ｆ）?ｐｉｃ?Ｂ；??圖中沒有共同字母的組別顯著不同，尸＜０．０５??Ｆｉｇｕｒｅ?２．４?
【參考文獻】：
期刊論文
[1]杯狀細胞及腸道黏液屏障的功能研究[J]. 黃春蘭,曾悅. 國際消化病雜志. 2017(06)
[2]乳酸桿菌S-層蛋白的特性及功能性研究進展[J]. 石曉璐,張英春,張?zhí)m威,向鑫玲. 微生物學通報. 2017(05)
[3]抗嗜水氣單胞菌NJ-1感染的乳酸菌篩選及其免疫調節(jié)作用[J]. 王彥波,任真真,張巖,傅玲琳. 水產學報. 2016(03)
[4]OCT蛋白對豬鏈球菌生物被膜形成和細胞黏附的影響[J]. 梅京京,汪洋,易力,張建康,程相朝,張春杰,余祖華,吳庭才. 中國獸醫(yī)科學. 2016(02)
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[6]乳酸菌腸道表面的粘附機制與生物效應[J]. 孔維甲,楊向往,劉章. 飼料與畜牧. 2014(07)
[7]人體益生菌種類及其功能的最新研究[J]. 汪孟娟,徐海燕,辛國芹,武香玉,曹銀生,谷巍. 畜牧與飼料科學. 2013(01)
[8]我國主要的食源性致病菌[J]. 趙懷龍,付留杰,唐功臣. 醫(yī)學動物防制. 2012(11)
[9]國內益生菌制劑臨床應用狀況分析[J]. 王文建,鄭躍杰. 中國微生態(tài)學雜志. 2009(01)
[10]腸球菌表面蛋白基因與生物膜形成關系的探討[J]. 馬立艷,許淑珍. 山東醫(yī)藥. 2006(05)
碩士論文
[1]屎腸球菌WEFA23拮抗單核增生李斯特菌黏附定植的作用研究[D]. 許雄鵬.南昌大學 2018
本文編號：3308343
【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校
【文章頁數】：76 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
圖２．２表面蛋白抑制單核增生李斯特菌內化Ｃａｃｏ－２細胞作用；圖中沒有共同字母的組別顯??著不同，尸＜０．０５??
第二章屎腸球菌ＷＥＦＡ２３表面蛋白抑制單核增生李斯特菌內化腸上皮細胞機制??２．４實驗結果??２．４．１表面蛋白對Ｃａｃｏ－２細胞增殖活性影響??以Ｃａｃｏ－２細胞為模型，ＳＬＰ為研究對象，利用ＣＣＫ－８法檢測細胞的增殖活??性。不同濃度的ＳＬＰ作用于Ｃａｃｏ－２細胞后増殖效果如圖２．１所示。結果表明２５－??８００?ｐｇ／ｍＬ?ＳＬＰ對Ｃａｃｏ－２細胞增殖均無顯著影響，表明ＳＬＰ對Ｃａｃｏ－２細胞無毒??性。選用５０、１００和２０〇ｎｇ／ｍＬ的ＳＬＰ進行后續(xù)實驗。??１５０－??ｉ：ｉｌｌｌ??０?２５?５０?１００?２００?４００?８００??ＣＯＮＣＥＮＴＲＡＴＩＯＮ?（＾ｇ／ｍＬ）??圖２．１不同濃度表面蛋白對Ｃａｃｏ－２細胞增殖的影響??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ＳＬＰ?ｏｎ?Ｃａｃｏ－２?ｃｅｌｌｓ?ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．??２．４．２表面蛋白抑制單核增生李斯特菌內化Ｃａｃｏ－２細胞??為了研究ＳＬＰ對內化Ｃａｃｏ－２細胞的影響，采用競爭、排斥和替換實驗??進行檢測。結果如圖２．２所示，ＳＬＰ僅在排斥實驗中顯著拮抗內化Ｃａｃｏ－２細??胞，減少胞內單核增生李斯特菌數量（尸＜０．０５）。??虧６１??彡??—聞上?—險?ｈ?二?ｊ！ｊ?＾２?Ｃｏｎｔｒｏｌ??Ｓ?４■目圈■?蘭聞?＿?＝?：；：?Ｈ?Ｓ?Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ?ａｓｓａｙ??Ｔ?三?ｒａ?■?三尚■?＝?Ｈ?ＫＢｉ?Ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ?ａｓｓａｙ??§?＝?ｍ?Ｈ?三會：■■?Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ?ａｓｓａｙ??�。誓_丨ｉｉ，Ｕ?ｋｉ，＿＿??５０?＾ｉｇ
圖２．４單核增生李斯特菌相關毒力因子轉錄水平變化；??（Ａ）?ｉｎｉ?Ａ＼?ｉＢ）?ｉｎｉ?Ｂ；?ＣＣ）?ａｃｔ?Ａ；?（Ｄ）?ｐｒｆＡ＼?（Ｅ）?ｐｉｃ?Ａ；?（Ｆ）?ｐｉｃ?Ｂ；??圖中沒有共同字母的組別顯著不同，尸＜０．０５??Ｆｉｇｕｒｅ?２．４?
【參考文獻】：
期刊論文
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[2]乳酸桿菌S-層蛋白的特性及功能性研究進展[J]. 石曉璐,張英春,張?zhí)m威,向鑫玲. 微生物學通報. 2017(05)
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[6]乳酸菌腸道表面的粘附機制與生物效應[J]. 孔維甲,楊向往,劉章. 飼料與畜牧. 2014(07)
[7]人體益生菌種類及其功能的最新研究[J]. 汪孟娟,徐海燕,辛國芹,武香玉,曹銀生,谷巍. 畜牧與飼料科學. 2013(01)
[8]我國主要的食源性致病菌[J]. 趙懷龍,付留杰,唐功臣. 醫(yī)學動物防制. 2012(11)
[9]國內益生菌制劑臨床應用狀況分析[J]. 王文建,鄭躍杰. 中國微生態(tài)學雜志. 2009(01)
[10]腸球菌表面蛋白基因與生物膜形成關系的探討[J]. 馬立艷,許淑珍. 山東醫(yī)藥. 2006(05)
碩士論文
[1]屎腸球菌WEFA23拮抗單核增生李斯特菌黏附定植的作用研究[D]. 許雄鵬.南昌大學 2018
本文編號：3308343
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