目的克隆幽門螺桿菌hpaA基因,構(gòu)建hpaA-pET-32a重組質(zhì)粒,并對(duì)其重組蛋白進(jìn)行表達(dá)純化,為其進(jìn)一步的免疫研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ).方法采用PCR方法,從幽門螺桿菌臨床分離菌株中擴(kuò)增hpaA基因,T-A克隆后測(cè)定核苷酸序列,通過(guò)表達(dá)載體pET-32a構(gòu)建的hpaA的重組質(zhì)粒,在E.coliBL21（DE3）宿主菌中用不同濃度的IPTG誘導(dǎo)表達(dá),最后對(duì)重組蛋白進(jìn)行純化.結(jié)果重組質(zhì)粒hpaA-pET-32a經(jīng)雙酶切、PCR及測(cè)序證明構(gòu)建成功,經(jīng)誘導(dǎo)重組蛋白成功表達(dá),以包涵體蛋白的形式存在,對(duì)其純化后獲得了高純度的重組蛋白.結(jié)論成功構(gòu)建幽門螺桿菌hpaA的原核表達(dá)系統(tǒng),并對(duì)其重組蛋白進(jìn)行了表達(dá)純化. 

【文章來(lái)源】：北華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2020,21(01)

【文章頁(yè)數(shù)】：3 頁(yè)

【部分圖文】：

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物

hpa A-p ET-32a雙酶切

用IPTG誘導(dǎo)hpaA蛋白表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物主要存在于超聲破碎物離心后的沉淀中．將沉淀物進(jìn)行純化，成功獲取目的蛋白．見圖3．凝膠成像系統(tǒng)分析其純度大于90%.3 討論


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