發(fā)布時間：2021-07-23 04:49

　　【目的】構(gòu)建能在Sf9昆蟲細胞中穩(wěn)定高效表達中華蜜蜂氣味受體AcerOr1的重組表達載體,并對其功能進行分析�！痉椒ā繉⒛康幕駻cerOr1和昆蟲表達載體pIB/V5-His載體用Bam HI和EcoRI做雙酶切,通過T4DNA連接酶構(gòu)建成含目的基因AcerOr1的表達載體pIB/V5-AcerOr1。將重組表達載體用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)染至Sf9細胞中,利用免疫熒光和Western blot檢測AcerOr1蛋白的亞細胞定位和表達情況;利用全波長多功能酶標儀檢測該受體對4種花香物質(zhì)刺激后細胞內(nèi)Ca²⁺濃度的變化。【結(jié)果】成功構(gòu)建重組表達載體pIB/V5-AcerOr1并建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系;Western blot結(jié)果證明重組表達載體能在昆蟲細胞Sf9中表達;免疫熒光顯示重組表達載體在Sf9細胞膜上表達,與預測結(jié)果一致。轉(zhuǎn)染pIB/V5-AcerOr1的細胞受花香物質(zhì)月桂酸（Lauric acid）、亞麻酸（Linolenic acid）、α-松油醇（α-Terpineol）、十一酸（Undecanoic acid）刺激時,均能引起細胞內(nèi)Ca²⁺

【文章來源】：福建農(nóng)業(yè)學報. 2020,35(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁


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