基于激素生物標志物的斑馬魚內分泌干擾效應綜合評價模型的建立及其在三種殺菌劑評價中的應用
發(fā)布時間：2021-07-20 17:59
隨著工業(yè)和社會的進步,越來越多的內分泌干擾物進入我們的生活環(huán)境。它們會引起內分泌干擾效應,對生物體生長、發(fā)育、繁殖、代謝等多個方面具有危害。而目前對內分泌干擾物的毒性評價往往只關注一種或少數幾種干擾效應,并只進行比較片面的單一評價。為全面了解和評估內分泌干擾物的內分泌干擾作用,亟需建立新的研究模型用于綜合評價內分泌干擾物的多種干擾效應。本研究以斑馬魚為模式生物,選擇代表腎上腺素、性激素、甲狀腺素、垂體激素等不同內分泌系統(tǒng)的23種激素為生物標志物,利用超高效液相色譜-串聯質譜（UPLC-MS/MS）可以同時檢測多種物質的優(yōu)勢,建立基于激素生物標志物的斑馬魚內分泌干擾效應綜合評價模型。該方法可有效去除基質干擾,相對回收率好,準確度和精密度高。方法基質效應基本處于67.3%-132.1%之間,相對回收率基本處于73.4%-110.2%之間,方法誤差≤13.8%,方法相對標準偏差介于0.3%-20.0%之間。以建立的模型為基礎,研究丙環(huán)唑、戊唑醇、腈菌唑三種廣泛使用的三唑類殺菌劑的內分泌干擾效應。三種殺菌劑對不同類型的激素生物標志物表現出不同程度的干擾作用,干擾趨勢也存在差異性。它們普遍對肽類...
【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數】：88 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
本研究的技術路線
浙江大學碩士學位論文3.丙環(huán)唑等三種殺菌劑單獨暴露的內分泌干擾效應23之后采用QuEChERS方法對斑馬魚樣品進行前處理，具體前處理方法參照2.2.2。3.2.3儀器分析條件參照2.2.3。3.3結果與討論3.3.1對氨基酸衍生物類激素的干擾效應丙環(huán)唑對斑馬魚成魚氨基酸衍生物類激素的干擾效應如圖3.1所示。隨著丙環(huán)唑暴露濃度的增加，NE、E和MT的含量變化均無顯著性差異，說明這幾種氨基酸衍生物類激素對丙環(huán)唑的干擾并不敏感。丙環(huán)唑暴露對斑馬魚T3和T4的影響也不明顯，僅在高濃度暴露即100μg·L-1條件下，雌魚體內的T3才呈現顯著性增加，而T4的含量無顯著變化，表明T3相較于T4對丙環(huán)唑的干擾效應可能更敏感。雄魚體內T3和T4含量均無明顯變化。戊唑醇對氨基酸衍生物類激素的干擾效應如圖3.2所示。NE在各個濃度暴露組均呈現不同程度的顯著性降低但高濃度組其含量又有所回升，其中雄魚經10ng·L-1暴露后NE降低了約55%，表明NE對戊唑醇的干擾較敏感。此外。E圖3.1丙環(huán)唑暴露組斑馬魚氨基酸衍生物類激素含量Figure3.1Levelsofaminoacidderivativehormonesinzebrafishexposedtopropiconazole*、**、***分別表示p<0.05、p<0.01、p<0.001水平，無符號表示無顯著性差異。*、**、***respectivelyrepresentp<0.05、p<0.01、p<0.001.Notextmeansnosignificantdifference.
浙江大學碩士學位論文3.丙環(huán)唑等三種殺菌劑單獨暴露的內分泌干擾效應24是NE經苯乙胺-N-甲基轉移酶作用甲基化而形成的代謝產物，NE含量變化影響了E的生成，導致其含量也有所降低。MT的含量在雌雄魚暴露實驗中均無明顯變化，表明戊唑醇對其干擾較校甲狀腺激素在雄魚實驗中只有T3當暴露濃度為100ng·L-1時顯著增加；雌魚暴露實驗中，T3在10ng·L-1時增加到6ng·g-1，T4在1μg·L-1時增加到5ng·g-1，與對照組相比顯著增加。腈菌唑對斑馬魚成魚的氨基酸衍生物類激素的干擾效應如圖3.3所示。NE和E的變化趨勢與戊唑醇暴露組相同。而與戊唑醇暴露組不同的是，MT的含量在暴露組也明顯減少。相比于腎上腺素和褪黑素，甲狀腺類激素對腈菌唑的干擾響應敏感度低。在雄魚各個濃度的腈菌唑暴露組中，甲狀腺類激素的含量與對照組相比均無顯著性差異。雌魚體內T3、T4的含量只在最高濃度100μg·L-1顯著增加。目前對三唑類殺菌劑的內分泌干擾效應研究較少，但已知多種內分泌干擾物都具有腎上腺激素干擾效應，如有機磷農藥毒死蜱等[114]。戊唑醇和腈菌唑暴露會引起NE和E的顯著降低，說明它們可能也具有腎上腺素干擾效應。MT作為圖3.2戊唑醇暴露組斑馬魚氨基酸衍生物類激素含量Figure3.2Levelsofaminoacidderivativehormonesinzebrafishexposedtotebuconazole*、**、***分別表示p<0.05、p<0.01、p<0.001水平，無符號表示無顯著性差異。*、**、***respectivelyrepresentp<0.05、p<0.01、p<0.001.Notextmeansnosignificantdifference.
【參考文獻】：
期刊論文
[1]3種三唑類殺菌劑對斑馬魚的毒性研究[J]. 葛婧,蔣金花,蔡磊明. 浙江農業(yè)學報. 2018(05)
[2]5種殺菌劑對3種水生生物的急性毒性與安全性評價[J]. 李祥英,梁慧君,何裕堅,李志鴻,陳浩華,謝俊婷,張宏濤. 廣東農業(yè)科學. 2014(16)
[3]Ⅱ-型擬除蟲菊酯對雄性小鼠腦內褪黑素含量的影響[J]. 柴曉靜,劉大勇,陸莉. 現代預防醫(yī)學. 2011(20)
[4]三唑類殺菌劑對斑馬魚急性毒性研究[J]. 郭晶,宋文華,丁峰,張金洋,李貞,陳小瑩,張金花,連杰. 東南大學學報(醫(yī)學版). 2010(04)
本文編號：3293311
【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數】：88 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
本研究的技術路線
浙江大學碩士學位論文3.丙環(huán)唑等三種殺菌劑單獨暴露的內分泌干擾效應23之后采用QuEChERS方法對斑馬魚樣品進行前處理，具體前處理方法參照2.2.2。3.2.3儀器分析條件參照2.2.3。3.3結果與討論3.3.1對氨基酸衍生物類激素的干擾效應丙環(huán)唑對斑馬魚成魚氨基酸衍生物類激素的干擾效應如圖3.1所示。隨著丙環(huán)唑暴露濃度的增加，NE、E和MT的含量變化均無顯著性差異，說明這幾種氨基酸衍生物類激素對丙環(huán)唑的干擾并不敏感。丙環(huán)唑暴露對斑馬魚T3和T4的影響也不明顯，僅在高濃度暴露即100μg·L-1條件下，雌魚體內的T3才呈現顯著性增加，而T4的含量無顯著變化，表明T3相較于T4對丙環(huán)唑的干擾效應可能更敏感。雄魚體內T3和T4含量均無明顯變化。戊唑醇對氨基酸衍生物類激素的干擾效應如圖3.2所示。NE在各個濃度暴露組均呈現不同程度的顯著性降低但高濃度組其含量又有所回升，其中雄魚經10ng·L-1暴露后NE降低了約55%，表明NE對戊唑醇的干擾較敏感。此外。E圖3.1丙環(huán)唑暴露組斑馬魚氨基酸衍生物類激素含量Figure3.1Levelsofaminoacidderivativehormonesinzebrafishexposedtopropiconazole*、**、***分別表示p<0.05、p<0.01、p<0.001水平，無符號表示無顯著性差異。*、**、***respectivelyrepresentp<0.05、p<0.01、p<0.001.Notextmeansnosignificantdifference.
浙江大學碩士學位論文3.丙環(huán)唑等三種殺菌劑單獨暴露的內分泌干擾效應24是NE經苯乙胺-N-甲基轉移酶作用甲基化而形成的代謝產物，NE含量變化影響了E的生成，導致其含量也有所降低。MT的含量在雌雄魚暴露實驗中均無明顯變化，表明戊唑醇對其干擾較校甲狀腺激素在雄魚實驗中只有T3當暴露濃度為100ng·L-1時顯著增加；雌魚暴露實驗中，T3在10ng·L-1時增加到6ng·g-1，T4在1μg·L-1時增加到5ng·g-1，與對照組相比顯著增加。腈菌唑對斑馬魚成魚的氨基酸衍生物類激素的干擾效應如圖3.3所示。NE和E的變化趨勢與戊唑醇暴露組相同。而與戊唑醇暴露組不同的是，MT的含量在暴露組也明顯減少。相比于腎上腺素和褪黑素，甲狀腺類激素對腈菌唑的干擾響應敏感度低。在雄魚各個濃度的腈菌唑暴露組中，甲狀腺類激素的含量與對照組相比均無顯著性差異。雌魚體內T3、T4的含量只在最高濃度100μg·L-1顯著增加。目前對三唑類殺菌劑的內分泌干擾效應研究較少，但已知多種內分泌干擾物都具有腎上腺激素干擾效應，如有機磷農藥毒死蜱等[114]。戊唑醇和腈菌唑暴露會引起NE和E的顯著降低，說明它們可能也具有腎上腺素干擾效應。MT作為圖3.2戊唑醇暴露組斑馬魚氨基酸衍生物類激素含量Figure3.2Levelsofaminoacidderivativehormonesinzebrafishexposedtotebuconazole*、**、***分別表示p<0.05、p<0.01、p<0.001水平，無符號表示無顯著性差異。*、**、***respectivelyrepresentp<0.05、p<0.01、p<0.001.Notextmeansnosignificantdifference.
【參考文獻】：
期刊論文
[1]3種三唑類殺菌劑對斑馬魚的毒性研究[J]. 葛婧,蔣金花,蔡磊明. 浙江農業(yè)學報. 2018(05)
[2]5種殺菌劑對3種水生生物的急性毒性與安全性評價[J]. 李祥英,梁慧君,何裕堅,李志鴻,陳浩華,謝俊婷,張宏濤. 廣東農業(yè)科學. 2014(16)
[3]Ⅱ-型擬除蟲菊酯對雄性小鼠腦內褪黑素含量的影響[J]. 柴曉靜,劉大勇,陸莉. 現代預防醫(yī)學. 2011(20)
[4]三唑類殺菌劑對斑馬魚急性毒性研究[J]. 郭晶,宋文華,丁峰,張金洋,李貞,陳小瑩,張金花,連杰. 東南大學學報(醫(yī)學版). 2010(04)
本文編號：3293311
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