褶紋冠蚌谷胱甘肽硫轉移酶和超氧化物歧化酶基因的表達與功能分析
發(fā)布時間：2021-07-13 08:23
谷胱甘肽-S-轉移酶（GSTs）是多功能的II期解毒酶,其催化親電子底物與谷胱甘肽的連接,在保護生物體免受活性氧物質毒性方面起重要作用。本文從褶紋冠蚌Cristaria plicata克隆了一個alpha級GST（CpGST5）cDNA序列。CpGST5 cDNA的全長為1885 bp,開放閱讀框為669 bp,編碼222個氨基酸。蛋白結構分析表明CpGST5的成熟肽包括2個典型結構域,保守域GSTN和保守結構域GSTC,N末端含有GSH結合位點（G位點）。C末端中含有底物結合口袋（H位點）的位點。實時定量PCR結果顯示在各組織中CpMnSOD mRNA組成型表達。CpGST5基因在肝胰腺中表達量最高,外套膜中表達量最低。在微囊藻毒素刺激后,肝胰腺和血淋巴中CpGST5的表達水平顯示出顯著增加的趨勢。重組CpGST5在大腸桿菌中表達為包涵體形式。錳超氧化物歧化酶（Manganese Superoxide Dismutase,MnSOD）是一種重要的金屬酶,催化ROS在生物體內形成無害的分子氧和過氧化氫。本文通過cDNA末端PCR的快速擴增,使...
【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：62 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
總RNA檢測
圖 2.1 總 RNA 檢測Fig. 2.1 Electrophoresis detection of total RNA2.7.2 褶紋冠蚌 GST5 基因的克隆根據(jù)構建的褶紋冠蚌血細胞轉錄組文庫篩選出了 CpMnSOD 和 CpGST5 基因片段，分別設計引物 CpMnSOD-F1, CpMnSOD-R1 和 CpGST5-F1, CpGST5-R1擴增其中間片段，然后分別設計特異引物擴增獲得 3’末端和 5’末端序列。（A） (B) (C)
第二章 褶紋冠蚌 GST 和 MnSOD 基因的表達與功能分析注:起始密碼子和終止密碼子用下劃線標示，保守域 GST_N 以灰色陰影顯示。 預測的保守結構域 GST_C 以綠色陰影顯示。N_terminal 中的 GSH 結合位點（G 位點）加下劃線。C_terminal 中底物結合口袋（H 位點）的位點用紅色陰影顯示。Fig. 2.3 Information of Cp GST5 sequences Note: The start codon and the stop codon were underlined, The conserved domains GST_Nis shaded in gray. The predicted conserved domains GST_C is shaded in green. GSH-binding sites(G-site) in N_terminal is underlined. Sites of substrate binding pocket (H-site) in C_terminal isshaded in red.2.7.4 CpGST5 氨基酸推導序列的同源性比對將褶紋冠蚌 CpGST5 推導氨基酸序列與 13 種物種的 GST5 的氨基酸序列進行同源多序列比對，結果顯示，這些物種之間存在相似性。褶紋冠蚌 GST5 氨基酸序列與紫貽貝（Mytilus galloprovincialis）的同源性最高，達到 47.17%(圖 2.4)。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]微囊藻毒素對鴨胚的毒性及半致死劑量研究[J]. 張曉波,李曉青,李璟,程培,袁琪,張易祥. 安徽農(nóng)業(yè)科學. 2011(19)
[2]超氧化物歧化酶的生理活性[J]. 朱秀敏. 當代醫(yī)學. 2011(15)
[3]蕁麻疹患者血清中SOD、MDA的檢測及其意義[J]. 趙旭傳,郜玉玲,尉莉. 中國麻風皮膚病雜志. 2008(01)
[4]超氧化物歧化酶（SOD）的研究和應用進展[J]. 林慶斌,廖升榮,熊亞紅,樂學義. 化學世界. 2006(06)
[5]微囊藻毒素對水生生物的生態(tài)毒理學研究進展[J]. 胡智泉,李敦海,劉永定,何光源. 自然科學進展. 2006(01)
[6]超氧化物歧化酶的現(xiàn)狀研究進展[J]. 田春美,鐘秋平. 中國熱帶醫(yī)學. 2005(08)
[7]微囊藻毒素對褶皺臂尾輪蟲的毒性效應和種群增長影響[J]. 陳艷,王金秋,王陽,俞順章. 中國環(huán)境科學. 2002(03)
[8]超氧化物歧化酶在食品和化妝品中的應用及其發(fā)酵法生產(chǎn)進展[J]. 崔慧斐,張?zhí)烀? 藥物生物技術. 2000(03)
[9]超氧物歧化酶的研究進展和應用前景[J]. 張博潤,譚華榮. 微生物學通報. 1992(06)
博士論文
[1]三角帆蚌肽聚糖識別蛋白和谷胱甘肽硫轉移酶的基因克隆和功能分析[D]. 楊子彥.華中科技大學 2013
碩士論文
[1]褶紋冠蚌GST基因克隆與表達分析[D]. 察玉端.南昌大學 2016
[2]松江鱸（Trachidermus fasciatus）谷胱甘肽S-轉移酶基因的克隆、表達與功能分析[D]. 張秋霞.山東大學 2013
[3]近江牡蠣（Crassostrea hongkongensis）谷胱甘肽S轉移酶和金屬硫蛋白基因cDNA克隆及原核表達研究[D]. 張妍.暨南大學 2012
[4]褶紋冠蚌谷胱甘肽硫轉移酶和谷胱甘肽過氧化物酶基因的分子克隆、表達及功能鑒定[D]. 鄧利榮.南昌大學 2011
[5]褶紋冠蚌超氧化物歧化酶基因的原核表達及蛋白性質研究[D]. 徐歡歡.南昌大學 2011
本文編號：3281719
【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：62 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
總RNA檢測
圖 2.1 總 RNA 檢測Fig. 2.1 Electrophoresis detection of total RNA2.7.2 褶紋冠蚌 GST5 基因的克隆根據(jù)構建的褶紋冠蚌血細胞轉錄組文庫篩選出了 CpMnSOD 和 CpGST5 基因片段，分別設計引物 CpMnSOD-F1, CpMnSOD-R1 和 CpGST5-F1, CpGST5-R1擴增其中間片段，然后分別設計特異引物擴增獲得 3’末端和 5’末端序列。（A） (B) (C)
第二章 褶紋冠蚌 GST 和 MnSOD 基因的表達與功能分析注:起始密碼子和終止密碼子用下劃線標示，保守域 GST_N 以灰色陰影顯示。 預測的保守結構域 GST_C 以綠色陰影顯示。N_terminal 中的 GSH 結合位點（G 位點）加下劃線。C_terminal 中底物結合口袋（H 位點）的位點用紅色陰影顯示。Fig. 2.3 Information of Cp GST5 sequences Note: The start codon and the stop codon were underlined, The conserved domains GST_Nis shaded in gray. The predicted conserved domains GST_C is shaded in green. GSH-binding sites(G-site) in N_terminal is underlined. Sites of substrate binding pocket (H-site) in C_terminal isshaded in red.2.7.4 CpGST5 氨基酸推導序列的同源性比對將褶紋冠蚌 CpGST5 推導氨基酸序列與 13 種物種的 GST5 的氨基酸序列進行同源多序列比對，結果顯示，這些物種之間存在相似性。褶紋冠蚌 GST5 氨基酸序列與紫貽貝（Mytilus galloprovincialis）的同源性最高，達到 47.17%(圖 2.4)。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]微囊藻毒素對鴨胚的毒性及半致死劑量研究[J]. 張曉波,李曉青,李璟,程培,袁琪,張易祥. 安徽農(nóng)業(yè)科學. 2011(19)
[2]超氧化物歧化酶的生理活性[J]. 朱秀敏. 當代醫(yī)學. 2011(15)
[3]蕁麻疹患者血清中SOD、MDA的檢測及其意義[J]. 趙旭傳,郜玉玲,尉莉. 中國麻風皮膚病雜志. 2008(01)
[4]超氧化物歧化酶（SOD）的研究和應用進展[J]. 林慶斌,廖升榮,熊亞紅,樂學義. 化學世界. 2006(06)
[5]微囊藻毒素對水生生物的生態(tài)毒理學研究進展[J]. 胡智泉,李敦海,劉永定,何光源. 自然科學進展. 2006(01)
[6]超氧化物歧化酶的現(xiàn)狀研究進展[J]. 田春美,鐘秋平. 中國熱帶醫(yī)學. 2005(08)
[7]微囊藻毒素對褶皺臂尾輪蟲的毒性效應和種群增長影響[J]. 陳艷,王金秋,王陽,俞順章. 中國環(huán)境科學. 2002(03)
[8]超氧化物歧化酶在食品和化妝品中的應用及其發(fā)酵法生產(chǎn)進展[J]. 崔慧斐,張?zhí)烀? 藥物生物技術. 2000(03)
[9]超氧物歧化酶的研究進展和應用前景[J]. 張博潤,譚華榮. 微生物學通報. 1992(06)
博士論文
[1]三角帆蚌肽聚糖識別蛋白和谷胱甘肽硫轉移酶的基因克隆和功能分析[D]. 楊子彥.華中科技大學 2013
碩士論文
[1]褶紋冠蚌GST基因克隆與表達分析[D]. 察玉端.南昌大學 2016
[2]松江鱸（Trachidermus fasciatus）谷胱甘肽S-轉移酶基因的克隆、表達與功能分析[D]. 張秋霞.山東大學 2013
[3]近江牡蠣（Crassostrea hongkongensis）谷胱甘肽S轉移酶和金屬硫蛋白基因cDNA克隆及原核表達研究[D]. 張妍.暨南大學 2012
[4]褶紋冠蚌谷胱甘肽硫轉移酶和谷胱甘肽過氧化物酶基因的分子克隆、表達及功能鑒定[D]. 鄧利榮.南昌大學 2011
[5]褶紋冠蚌超氧化物歧化酶基因的原核表達及蛋白性質研究[D]. 徐歡歡.南昌大學 2011
本文編號：3281719
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