瓣?duì)詈怂醿?nèi)切酶（Flap Endonuclease 1,FEN1）是核酸酶Rad2超家族的一員,從古細(xì)菌到人類中均保守存在,能夠廣泛參與到DNA代謝途徑中。FEN1在DNA復(fù)制、重組和修復(fù)過程中的重要作用決定了其在維持基因組穩(wěn)定性中的關(guān)鍵地位,其表達(dá)或功能異常會導(dǎo)致生物體內(nèi)的多個生命過程發(fā)生紊亂,對機(jī)體產(chǎn)生嚴(yán)重的危害。因此,FEN1在生物體內(nèi)的表達(dá)和功能執(zhí)行必須受到嚴(yán)格、精確、及時地調(diào)控。前期研究顯示,翻譯后修飾對FEN1蛋白的活性、亞細(xì)胞定位及功能穩(wěn)定性起到重要的調(diào)控作用。其中,FEN1的�；ㄒ阴；顽牾；┬揎椏赡茉诩�(xì)胞代謝和DNA損傷修復(fù)過程中發(fā)揮作用,但其具體的作用機(jī)制和生物學(xué)效應(yīng)目前尚不明確。鑒于此,本文主要對FEN1的�；揎椩诰S持細(xì)胞基因組穩(wěn)定性中的功能及作用機(jī)制進(jìn)行了研究。我們通過構(gòu)建點(diǎn)突變細(xì)胞株,鑒定和驗(yàn)證了 FEN1的兩個�；揎椢稽c(diǎn)（Lys200和Lys201）。體外酶動力學(xué)活性實(shí)驗(yàn)顯示,與FEN1-WT蛋白相比,其點(diǎn)突變蛋白（K200E和K201E）的EXO活性和GEN活性分別下降了約40%和67%,表明該�；揎椏赡軈⑴cDNA損傷應(yīng)答和DNA修復(fù)過... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．２ＦＥＮ１的動態(tài)亞細(xì)胞定位ｎｌ??Ｆｉｇｕｒｅ?ｌ?．２?Ｄｙｎａｍｉｃ?ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ?ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＦＥＮ?ｌ??

ｄａｍａｇｅ?ｆｏｃｉ?，??圖１．２ＦＥＮ１的動態(tài)亞細(xì)胞定位ｎｌ??Ｆｉｇｕｒｅ?ｌ?．２?Ｄｙｎａｍｉｃ?ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ?ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＦＥＮ?ｌ??ＦＥＮｌ蛋白存在于細(xì)胞核和線粒體，可定位于哺乳動物細(xì)胞中的四個不同的亞細(xì)胞區(qū)室：??細(xì)胞質(zhì)，線粒體，核質(zhì)和核仁。為響應(yīng)細(xì)胞周期轉(zhuǎn)換和ＤＮＡ損傷，ＦＥＮ１通過四種不同的??途徑動態(tài)遷移：Ｉ代表來自細(xì)胞質(zhì)的核轉(zhuǎn)位；２代表來自核質(zhì)的核仁積累；３代表從核質(zhì)和??核仁形成復(fù)制／ＤＮＡ損傷的聚集；４代表從細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入到線粒體。ＦＥＮ１的核酸酶結(jié)構(gòu)表示??為藍(lán)色圓形，Ｃ－末端表示為Ｚ字形尾部。??１．３．２蛋白質(zhì)的相互作用??目前已鑒定出來自各種ＤＮＡ代謝途徑的超過３４種蛋白質(zhì)會與ＦＥＮ１蛋白相??互作用，但ＦＥＮ?１蛋白的分子量很小，一次最多只能和２－３個蛋白質(zhì)發(fā)生互作［６７］，??表明ＦＥＮ１順序性地參與各種代謝途徑。根據(jù)ＦＥＮ１的活性和功能，可以將這些??蛋白分為以下四大類（圖１．３）：??第一類：主要是在ＤＮＡ復(fù)制過程中發(fā)揮作用，以幫助ＦＥＮ１完成岡崎片段??成熟中ＲＮＡ引物的切除。在真核細(xì)胞中，首先由引物酶和ＤＮＡ聚合酶ｕ起始，??合成ＲＮＡ／ＤＮＡ引物。隨后

２．３．１?ＦＥＮ１的Ｌｙｓ２００＇?Ｌｙｓ２０１位點(diǎn)在進(jìn)化上高度保守??在ＮＣＢ１數(shù)據(jù)庫檢索ＦＥＮ１及其同源蛋白的序列，使用ＣｌｕｓｔｅｒＷ軟件比對，??發(fā)現(xiàn)ＦＥＮ１的Ｌｙｓ２００、Ｌｙｓ２０１位點(diǎn)在不同種屬生物中都是高度保守的（

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Construction of Yeast Vectors with Resistance to Geneticin[J]. 林會蘭,張廣,周全,陳國強(qiáng).  Tsinghua Science and Technology. 2002(04)



本文編號：3278696