通過控制電穿孔時的電壓、電脈沖時長、電脈沖次數(shù)、質(zhì)粒濃度和細胞狀態(tài)等轉染條件,將pcDNA3.1（+）-EGFP質(zhì)粒轉入MCF-7細胞,于倒置熒光顯微鏡下觀察EGFP表達情況以檢測轉染效率,探討不同電穿孔條件對人乳腺癌MCF-7細胞轉染效率的影響,確定MCF-7細胞的最佳電轉染條件。結果表明:人乳腺癌細胞MCF-7在電壓150 V、質(zhì)粒濃度1μg/μL左右、脈沖數(shù)2次、脈沖時長5 ms、傳代時間24 h時可達到較高的電轉染率。 

【文章來源】：生物化工. 2020,6(01)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

不同電壓條件對人乳腺癌細胞MCF-7電轉染效率的影響

當電脈沖次數(shù)為2次，電脈沖時長為5 ms，電壓值為150 V，按照表2中的質(zhì)粒濃度進行電轉染實驗。由單因素方差分析可知，質(zhì)粒濃度為1.176μg/μL條件下獲得最大轉染效率為66.20%±2.48%；從圖2中可觀察出隨著質(zhì)粒濃度的不斷提高（0.377～0.985μg/μL），轉染效率相應提高，但當質(zhì)粒濃度為1μg/μL左右（0.985～1.176μg/μL）時，由獨立樣本t檢驗分析可知，質(zhì)粒濃度的變化對細胞轉染效率的影響不顯著（P>0.05），提示電轉染時質(zhì)粒濃度存在飽和性問題，1μg/μL很可能是其閾濃度。2.3 電脈沖次數(shù)對轉染效率的影響

當電脈沖時長為5 ms，質(zhì)粒濃度為1.176μg/μL，電壓值為150 V，按照表3中的電脈沖次數(shù)進行電轉實驗。由單因素方差分析可知，脈沖次數(shù)為2次時獲得最大轉染效率66.20%±2.48%；由圖3和獨立樣本t檢驗分析結果可知，脈沖次數(shù)為2時與1次及3次時的轉染效率差異均有顯著性意義（P<0.05）。2.4 電脈沖時長對轉染效率的影響


本文編號：3250961