靈芝是我國傳統(tǒng)的名貴中藥,其含有的活性成分主要是靈芝多糖與靈芝三萜類化合物。現(xiàn)在市面上存在大量的靈芝類保健品,添加了靈芝成分的化妝品、護膚品等,隨著社會壓力與人口老齡化的加劇,各個年齡段的人群對健康都日益重視。隨著對靈芝的藥理功效等的研究越來越深入透徹,以及人們對于藥食同源等理念愈加廣泛的接受,可以預見未來市場對于靈芝產(chǎn)品的需求也將會更加旺盛。因此科研與產(chǎn)業(yè)都急需要高品質(zhì)的原材料原料用于產(chǎn)品的研發(fā),然而由于近年來靈芝的育種技術(shù)缺乏創(chuàng)新,導致市場需要的高多糖含量的專用種質(zhì)資源十分匱乏。所以本論文擬以高多糖的菌株為出發(fā)菌株,利用紫外和ARTP誘變技術(shù),對出發(fā)菌株的原生質(zhì)體進行誘變處理,以獲得高多糖的誘變菌株。本論文的取得生物主要研究成果如下:（1）優(yōu)化出優(yōu)良出發(fā)菌株的篩選與原生質(zhì)體制備條件對于出發(fā)菌株進行了原生質(zhì)體的優(yōu)化與原生質(zhì)體活力的鑒定,得到原生質(zhì)體最佳制備條件為菌絲體第8天,酶解時間為3h,酶解溫度為31℃,收集原生質(zhì)體離心力為1811g,該條件下制備的原生質(zhì)體濃度達到1.3×10⁸,且經(jīng)過染色鑒定原生質(zhì)體活力證實活力良好,在普通再生平板上的原生質(zhì)體的再生率可達... 

【文章來源】：上海海洋大學上海市

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

0株供試菌株的多糖含量

上海海洋大學碩士學位論文12圖2-2培養(yǎng)時間對原生質(zhì)體再生率的影響Fig.2-2Effectofculturetimeonprotoplastregenerationrate2.3.3酶解時間對原生質(zhì)體再生率的影響通過圖2-3可以看出，在顯微鏡下觀察，當菌絲體酶解時間為2.5h時，菌絲體還沒有完全被酶解，殘留的菌絲體清晰可見；當酶解時間為3h時，菌絲體酶解比較充分，原生質(zhì)體大小一致；當酶解時間為3.5h時，原生質(zhì)體的大小出現(xiàn)差異，肉眼可見原生質(zhì)體聚集；當酶解時間為4h時，原生質(zhì)體懸液開始出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象。結(jié)合圖2-4可知，當酶解時間為3h時，G157菌株的原生質(zhì)體再生率最高，為2.97‰，所以選取酶解時間3h為G157菌株的最佳酶解時間。

上海海洋大學碩士學位論文13圖2-3顯微鏡觀察不同酶解時間下的原生質(zhì)體（×100）Fig.2-3Microscopeobservationofprotoplastsatdifferentenzymolysistimes（×100）圖2-4不同酶解時間、轉(zhuǎn)速對原生質(zhì)體再生率的影響Fig.2-4Effectofdifferentenzymolysistime、rotationalspeedsonprotoplastregenerationrate2.3.4離心力對原生質(zhì)體再生率的影響由圖2-4可以看出當轉(zhuǎn)速為3000rpm/min（離心力為1811g）時，原生質(zhì)體的再生率最高，為4‰，此時制備的原生質(zhì)體濃度達到2.09×108。結(jié)合菌絲體培養(yǎng)時間與酶解時間可知，當菌絲體培養(yǎng)時間為7d-10d，酶解時間3h，離心收集原生質(zhì)體的離心力為1811g時，原生質(zhì)體的再生率最佳。2.3.5正交試驗的結(jié)果根據(jù)單因素分析，確定酶解時間2.5h、3h、3.5h，轉(zhuǎn)速2500rpm(1258g)、3000rpm(1811g)、3500rpm(2465g)，生長時間為6、8、10天為三因素三水平的正交試驗。表2-1田口正交試驗設計和結(jié)果Table2-1DesignandResultsofTaguchiOrthogonalExperiment酶解時間(h)轉(zhuǎn)速(rpm/rcf)天數(shù)(d)再生率(‰)2.5250060.36±0.0122.5300081.24±0.0212.53500101.14±0.0153250082.78±0.01433000103.12±0.0233350062.76±0.0183.52500101.85±0.0163.5300062.78±0.0203.5350083.04±0.019

【參考文獻】：
期刊論文
[1]靈芝新品種康定靈芝選育研究[J]. 唐明先,陳杭,羅孝貴,何曉蘭,羊玉蓉,馬薇,戴旭光,降初拉爾布.  中國食用菌. 2018(05)
[2]紫外-ARTP復合誘變選育達巴萬星前體高產(chǎn)菌株[J]. 王小連,郄麗萍,馬婕,代明偉,鄧佩佩.  化學與生物工程. 2017(12)
[3]采用近紅外漫反射光譜進行牛樟芝菌絲體組分檢測的研究[J]. 初秋博,趙毅,劉燕隔,張元竹,周毓麟.  藥物分析雜志. 2017(10)
[4]紫外照射對靈芝菌絲體多糖的影響[J]. 張帥,黃嘉玲,林怡麗,程昊.  廣東農(nóng)業(yè)科學. 2017(08)
[5]常壓室溫等離子體（ARTP）誘變技術(shù)選育柱狀田頭菇（茶樹菇）優(yōu)良菌株研究初探[J]. 王謙,黃媛媛,宋長林.  菌物學報. 2017(06)
[6]基于近紅外漫反射光譜的云芝提取物多糖含量快速檢測研究[J]. 張鈺瑩,王星麗,涂紅艷,瞿亮,邵平.  核農(nóng)學報. 2017(04)
[7]基于ARTP誘變和高通量篩選的綠針假單胞菌GP72育種方法[J]. 江耀祖,彭華松,張雪洪.  微生物學通報. 2017(10)
[8]敞開式離子化質(zhì)譜技術(shù)在中草藥研究中的應用[J]. 黃鑫,劉文龍,張勇,劉淑瑩.  質(zhì)譜學報. 2017(01)
[9]靈芝菌絲體及發(fā)酵液中三萜化合物的研究進展[J]. 張容容,陳慧,劉高強,王曉玲.  食用菌學報. 2016(03)
[10]鈣離子和水楊酸誘導靈芝多糖和三萜的合成[J]. 葉麗云,林強,劉梅,吳小平.  菌物學報. 2017(02)

博士論文
[1]等離子體誘變靈芝及其藥用成分的紅外光譜分析[D]. 馬玉涵.中國科學技術(shù)大學 2018
[2]基于多尺度創(chuàng)新原理的工業(yè)微生物高通量篩選平臺構(gòu)建及應用研究[D]. 譚俊.華東理工大學 2013

碩士論文
[1]靈芝多糖合成途徑關(guān)鍵酶基因過表達的研究[D]. 李瑞勤.江南大學 2017
[2]靈芝菌絲體培養(yǎng)中多糖組分的變化與相關(guān)酶活性分析[D]. 王瓊.江南大學 2013
[3]草菇60Co誘變育種研究[D]. 林瑞蝦.福建農(nóng)林大學 2011



本文編號：3247085