干擾素（IFN）系統(tǒng)作為天然性免疫和適應(yīng)性免疫反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié),是抵御病毒感染的第一道防線,尤其是Ⅰ型IFN一直是臨床上用來治療病毒感染的有效藥物。因此,研制具有較高的抗病毒活性的IFN-,對開發(fā)基因工程抗病毒藥物十分重要。本研究采用RT-PCR技術(shù),從PHA誘導(dǎo)的北極狐、貉、犬外周血淋巴細(xì)胞中擴(kuò)增IFN-基因,序列分析比較結(jié)果表明,3種犬科動物的IFN-基因序列大小一致,均為561 bp,編碼186個氨基酸;核苷酸同源性達(dá)98.4%～100%,氨基酸序列同源性達(dá)97.3%～100%;與肉食類IFN-亞型相似,北極狐、貉和犬IFN-含5個N-糖基化位點(diǎn);應(yīng)用大腸桿菌表達(dá)貉IFN-成熟肽基因,獲得19 kD的重組蛋白,該蛋白的成功表達(dá)為開發(fā)高效抗病毒藥物奠定了研究基礎(chǔ)。 

【文章來源】：特產(chǎn)研究. 2020,42(01)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

貉IFN-同意義突變位點(diǎn).表示同意義突變位點(diǎn)

18.414.41.蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)；2、4、5.狐、貉和犬IFN-；3.空載體對照；7、8、9.未誘導(dǎo)對照。1.Marker;2,4,5.Arcticfox,raccoondoganddogIFN-;3.Emptybodycontrol;7,8,9.Uninducedcontrol.圖6北極狐、貉和犬IFN-SDS-PAGE電泳檢測Fig.6DetectionofSDS-PAGEelectrophoresisinarcticfox,rac-coondoganddogIFN-123KD60.045.035.025.014.41.貉IFN-重組蛋白；2.犬IFN-重組蛋白；3.蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)。1.RaccoondogIFN-recombinantprotein;2.DogIFN-recombinantprotein;3.Marker.圖7His-單抗Westernblot檢測貉和犬IFN-重組蛋白的表達(dá)Fig.7IdentificationofrecombinantproteinbyWesternblottingwithHis-tagmonoclonalantibody3討論本研究采用RT-PCR技術(shù)從PHA誘導(dǎo)的北極狐、貉、犬外周血淋巴細(xì)胞中擴(kuò)增了IFN-基因，從序列分析比較結(jié)果得出，北極狐IFN-與犬IFN-基因同源性最高，達(dá)100%，而貉與犬和北極狐的IFN-差異明顯，有9個核苷酸的變異，其中有5個同意義突變位點(diǎn)；預(yù)測的N-糖基化位點(diǎn)也有明顯差異，這一結(jié)果也說明，北極狐和犬的IFN-基因進(jìn)化關(guān)系更近一些，而貉較遠(yuǎn)。IFN-作為機(jī)體免疫中具有重要作用的細(xì)胞因子之一，也是機(jī)體免疫功能評判的重要指標(biāo)之一，本研究構(gòu)建了IFN-表達(dá)載體并成功表達(dá)了成熟肽蛋白，為開發(fā)IFN-獸用治療制劑提供了理論基矗基因工程干擾素與其他型干擾素相比較，有著很多優(yōu)點(diǎn)，例如污染小甚至沒有污染、安全性高、成本低等[14]，從而使干擾素商品化，廣泛應(yīng)用于臨床治療與免疫，為新獸藥的研發(fā)奠定基矗參考文獻(xiàn)[1]IsaacsA,LindenmannJ.Virusinterference.I.Theinterferon[J].P

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]犬IFN-β的克隆及其序列分析[J]. 黃夢秋,嵇辛勤,段志強(qiáng),李世靜,阮涌,萬彪,胡焱,鄧珊珊,龍丹丹,田宇杰.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2019(07)
[2]干擾素β的研究現(xiàn)狀[J]. 韓玉杰,王倩,張競.  化學(xué)工程與裝備. 2016(08)
[3]水貂β-干擾素基因的克隆、測序與遺傳進(jìn)化分析[J]. 張譯元,張廷紅,常維山.  中國獸藥雜志. 2012(01)
[4]干擾素-β1b的高效表達(dá)、純化及抗病毒活性研究[J]. 李武平,呂宏亮,段招軍,張麗萍,劉永清,吳斌文,陳勇,張成海,衣作安,魏開坤,侯云德.  病毒學(xué)報(bào). 2002(03)



本文編號：3242868