干擾素（IFN）系統(tǒng)作為天然性免疫和適應(yīng)性免疫反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié),是抵御病毒感染的第一道防線,尤其是Ⅰ型IFN一直是臨床上用來(lái)治療病毒感染的有效藥物。因此,研制具有較高的抗病毒活性的IFN-,對(duì)開(kāi)發(fā)基因工程抗病毒藥物十分重要。本研究采用RT-PCR技術(shù),從PHA誘導(dǎo)的北極狐、貉、犬外周血淋巴細(xì)胞中擴(kuò)增IFN-基因,序列分析比較結(jié)果表明,3種犬科動(dòng)物的IFN-基因序列大小一致,均為561 bp,編碼186個(gè)氨基酸;核苷酸同源性達(dá)98.4%～100%,氨基酸序列同源性達(dá)97.3%～100%;與肉食類IFN-亞型相似,北極狐、貉和犬IFN-含5個(gè)N-糖基化位點(diǎn);應(yīng)用大腸桿菌表達(dá)貉IFN-成熟肽基因,獲得19 kD的重組蛋白,該蛋白的成功表達(dá)為開(kāi)發(fā)高效抗病毒藥物奠定了研究基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：特產(chǎn)研究. 2020,42(01)

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

貉IFN-同意義突變位點(diǎn).表示同意義突變位點(diǎn)

18.414.41.蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)；2、4、5.狐、貉和犬IFN-；3.空載體對(duì)照；7、8、9.未誘導(dǎo)對(duì)照。1.Marker;2,4,5.Arcticfox,raccoondoganddogIFN-;3.Emptybodycontrol;7,8,9.Uninducedcontrol.圖6北極狐、貉和犬IFN-SDS-PAGE電泳檢測(cè)Fig.6DetectionofSDS-PAGEelectrophoresisinarcticfox,rac-coondoganddogIFN-123KD60.045.035.025.014.41.貉IFN-重組蛋白；2.犬IFN-重組蛋白；3.蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)。1.RaccoondogIFN-recombinantprotein;2.DogIFN-recombinantprotein;3.Marker.圖7His-單抗Westernblot檢測(cè)貉和犬IFN-重組蛋白的表達(dá)Fig.7IdentificationofrecombinantproteinbyWesternblottingwithHis-tagmonoclonalantibody3討論本研究采用RT-PCR技術(shù)從PHA誘導(dǎo)的北極狐、貉、犬外周血淋巴細(xì)胞中擴(kuò)增了IFN-基因，從序列分析比較結(jié)果得出，北極狐IFN-與犬IFN-基因同源性最高，達(dá)100%，而貉與犬和北極狐的IFN-差異明顯，有9個(gè)核苷酸的變異，其中有5個(gè)同意義突變位點(diǎn)；預(yù)測(cè)的N-糖基化位點(diǎn)也有明顯差異，這一結(jié)果也說(shuō)明，北極狐和犬的IFN-基因進(jìn)化關(guān)系更近一些，而貉較遠(yuǎn)。IFN-作為機(jī)體免疫中具有重要作用的細(xì)胞因子之一，也是機(jī)體免疫功能評(píng)判的重要指標(biāo)之一，本研究構(gòu)建了IFN-表達(dá)載體并成功表達(dá)了成熟肽蛋白，為開(kāi)發(fā)IFN-獸用治療制劑提供了理論基�；蚬こ谈蓴_素與其他型干擾素相比較，有著很多優(yōu)點(diǎn)，例如污染小甚至沒(méi)有污染、安全性高、成本低等[14]，從而使干擾素商品化，廣泛應(yīng)用于臨床治療與免疫，為新獸藥的研發(fā)奠定基矗參考文獻(xiàn)[1]IsaacsA,LindenmannJ.Virusinterference.I.Theinterferon[J].P

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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