氨基酸是無血清培養(yǎng)基中的重要組成部分,其種類和濃度配比對免疫細胞增殖和活化具有重要意義。為此,本文以自然殺傷細胞（Natural killer cells,NK-92）為對象,探究NK-92細胞體外擴增與氨基酸代謝之間的關(guān)系,從氨基酸的角度對無血清培養(yǎng)基進行理性設(shè)計與優(yōu)化。首先在自主設(shè)計的成分簡單且明確的無血清培養(yǎng)基SFM-MIN中分析了培養(yǎng)過程中NK-92細胞的氨基酸代謝特性,根據(jù)氨基酸的比消耗速率將谷氨酰胺、絲氨酸、亮氨酸和精氨酸初步確定為影響NK-92細胞體外擴增的關(guān)鍵氨基酸,并通過正交實驗確定4種氨基酸的最適濃度分別為13.00、0.40、1.15和0.70 mmol/l。將SFM-MIN中上述4種氨基酸的濃度調(diào)至最適水平后將其命名為SFM-OPT,以商業(yè)化無血清培養(yǎng)基為對照評價SFM-OPT對NK-92細胞的擴增效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)10 d后,SFM-OPT中的總細胞擴增倍數(shù)以及培養(yǎng)物中的CD3-CD56+細胞比例分別為164.06±35.94倍和（88.70±1.47）%,顯著高于對照組中的 54.25±12.14 倍和（69.83±3.11）%（p<0.05）;而... 

【文章來源】：華東理工大學(xué)上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．３氨基酸在主要代謝途徑中的位置節(jié)點％??（綠色線條表示中心碳代謝，英文字母表示不同的氨基酸）??Ｆｉｇ．?１．３?Ｐｏｓｉｔｉｏｎ?ｎｏｄｅ?ｏｆ?ａｍｉｎｏ?ａｃｉｄｓ?ｉｎ?ｍａｊｏｒ?ｍｅｔａｂｏｌｉｃ?ｐａｔｈｗａｙｓｆ３８］??

第２８頁?華東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文??（６９．８３±３．１１）％?（ｐ?＜０．０５Ｘ圖３．６Ｃ）。進一步按照２．３．５所述方法將擴增１０?ｄ后的ＮＫ－９２??細胞與癌細胞Ｋ５６２共培養(yǎng)評價其殺傷活性，在ＳＦＭ－ＯＰＴ培養(yǎng)的ＮＫ－９２細胞的殺傷活??性為（６５．３０±５．９６）?％，與對照組中培養(yǎng)的ＮＫ－９２細胞的殺傷活性（５９．４０±２．６５）?°／４目當(dāng)??（圖３．６Ｄ）。可見，優(yōu)化了氨基酸濃度的ＳＦＭ－ＯＰＴ可以更有效的促進ＮＫ－９２細胞的體??外擴增且不影響其功能。??Ａ?Ｂ??□?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＭＭ?ＳＦＭ－ＯＰＴ??＾?１００?－？?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＳＦＭ－ＯＰＴ?圣?‘??荽?Ｔ?＊?＊?＊?＾?２００－?Ｔ??ｓ?？?１?ｚ??２?ｆ?－．?．?￡ｉｓ〇－?Ｉ??＊３?１?ｉ?１００－?Ａ，?Ｉ??！－?１１＿?ｒ；?ｎｉ?ｔｉ??Ｐ?０?２￣￣４￣￣６８￣￣＾０?２?４?６?８?！０??Ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｔｉｔｎｃ（ｄ）?Ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｔｉｍｅ（（ｌ）??Ｃ?Ｄ??＊??１００１?Ｉ?８０－??Ｕ�。�?＿?Ｉ??」２］?＿?＿??ｃ—ｉ?ｓｆｍ〇ｐｔ?ｃＺｚｒ?ｓＳ〇ｐｔ—??圖３．６?ＮＫ－９２細胞在ＳＦＭ－ＯＰＴ中的效果驗證（ｎ＝３）??Ａ：細胞活性；Ｂ：總細胞擴增倍數(shù)；??Ｃ：?ＣＤ３＿ＣＤ５６＋細胞比例；Ｄ：?ＮＫ－９２細胞對Ｋ５６細胞的殺傷活性??Ｆｉｇ．?３．６?Ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＮＫ－９２?ｃｅｌｌｓ?ｉｎ?ＳＦＭ－ＯＰＴ?（ｎ?＝?３）；?Ｐ＜０．０５??Ａ：

華東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文?第３１頁??ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞比例并提高了?ＮＫ－９２細胞在培養(yǎng)后期的比生長速率，促進了?ＮＫ－９２細??胞的擴增。??漏眶：＿麵??奪：??圖４．１?ＮＫ－９２細胞在不同谷氨酰胺濃度下的細胞形態(tài)??（Ａ）２．００?ｍｍｏｌ／ｌ；?（Ｂ）?８．００?ｍｍｏｌ／１；?（Ｃ）?１０．５０?ｍｍｏｌ／１；??（Ｄ）?１３．００?ｍｍｏｌ／ｌ；（Ｅ）?１５．５０?ｍｍｏｌ／１；?（Ｆ）?２５．５０?ｍｍｏｌ／１；??Ｆｉｇ．?４．１?Ｔｈｅ?ｃｅｌｌ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ＮＫ－９２?ｃｅｌｌｓ?ａｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｇｌｕｔａｍｉｎｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ??（Ａ）２．００?ｍｍｏｌ／１；?（Ｂ）?８．００?ｍｍｏｌ／１；?（Ｃ）?１０．５０?ｍｍｏｌ／１；??（Ｄ）?１３．００?ｍｍｏｌ／ｌ；（Ｅ）?１５．５０?ｍｍｏｌ／１；?（Ｆ）?２５．５０?ｍｍｏｌ／１；??


本文編號：3241372