隨著分子生物學在基因工程中的發(fā)展利用,基因工程已經(jīng)成為獲得轉(zhuǎn)基因植株的一項重要工具,它對當代農(nóng)業(yè)的發(fā)展意義深遠。在轉(zhuǎn)基因技術(shù)中,應當闡明外源基因的功能和相關(guān)調(diào)控機制,以及它們在植物中的表達位點和表達水平。另外由于外源基因在植物中的表達需要通過結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子進行調(diào)節(jié),因此鑒定外源基因的啟動子及啟動子上調(diào)控元件的功能是至關(guān)重要的。本實驗室已有研究表明擬南芥β-葡萄糖苷酶19（Beta-glucosidase,BGLU19）基因啟動子能夠驅(qū)動外源基因在種子部位特異性表達,證明它是一個種子特異性啟動子。與此同時對At BGLU19啟動子的全長序列進行分析,鑒定出很多與其表達相關(guān)的順式作用元件。在這些參與種子特異性表達的順式作用元件中,RY元件與種子特異性表達密切相關(guān)。綠色熒光蛋白（GFP）是一類生物發(fā)光蛋白,它可以代替GUS基因作為轉(zhuǎn)基因植物的一種分子標記。因此在本次研究中,使用GFP基因作為報告基因,設(shè)計了At BGLU19啟動子序列上三個RY元件的突變序列,然后通過突變引物的PCR擴增得到了RY元件突變的啟動子片段,繼而連接到植物表達載體上。利用農(nóng)桿菌介導的浸花法將上述表達載體轉(zhuǎn)化至擬南芥中... 

【文章來源】：曲阜師范大學山東省

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
第一章 文獻綜述
    1.1 β-葡萄糖苷酶(BGLU)研究進展
        1.1.1 簡介
        1.1.2 β-葡萄糖苷酶的結(jié)構(gòu)及功能研究
        1.1.3 β-葡萄糖苷酶的應用
    1.2 植物組織特異型啟動子
        1.2.1 組織特異型啟動子
        1.2.2 種子特異性啟動子相關(guān)調(diào)控元件
        1.2.3 啟動子的研究方法
    1.3 本研究的目的及意義
    1.4 本研究的技術(shù)路線
第二章 實驗材料和方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 植物培養(yǎng)材料
        2.1.3 菌株和載體
        2.1.4 生化試劑、酶以及試劑盒
        2.1.5 實驗儀器
        2.1.6 常用溶液、培養(yǎng)基的配制方法
    2.2 實驗方法
        2.2.1 擬南芥At BGLU19 RY元件突變啟動子PCR擴增
        2.2.2 擬南芥At BGLU19 啟動子突變片段表達載體的構(gòu)建
        2.2.3 表達載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        2.2.4 浸花法侵染擬南芥
        2.2.5 轉(zhuǎn)基因植株的種植
        2.2.6 轉(zhuǎn)基因植株的篩選
        2.2.7 轉(zhuǎn)基因純系擬南芥檢測GFP熒光步驟
        2.2.8 半定量RT-PCR檢測GFP表達量
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 At BGLU19 啟動子各突變RY元件位點
    3.2 At BGLU19 RY元件突變啟動子植物表達載體的構(gòu)建
        3.2.1 At BGLU19 RY元件突變啟動子的PCR擴增
        3.2.2 表達載體的酶切鑒定
    3.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥純系的獲得
    3.4 GFP熒光檢測分析
        3.4.1 野生型與RY元件突變啟動子在種子階段的GFP熒光觀察
    3.5 半定量RT-PCR檢測GFP表達量
第四章 結(jié)論與討論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]棉花種子特異性啟動子的克隆及序列分析[J]. 周佳佳,孫覓真,張素青,伊海法,邢會賢,王麗媛,宋憲亮,孫學振.  山東農(nóng)業(yè)科學. 2014(06)
[2]β-葡萄糖苷酶I、L-6和IL-12在診斷新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎中的應用價值[J]. 李曉霞.  中國現(xiàn)代醫(yī)生. 2012(23)
[3]β-葡萄糖苷酶研究進展[J]. 楊曉寬.  河北科技師范學院學報. 2012(01)
[4]擬南芥根特異表達基因啟動子在煙草中的表達[J]. 呂山花,孫寬瑩,樊穎倫.  西北植物學報. 2011(06)
[5]種子特異性啟動子的研究進展[J]. 李吉濤,郭建春.  安徽農(nóng)業(yè)科學. 2008(04)
[6]種子特異性啟動子研究進展[J]. 劉曉娜,付暢,黃永芬.  植物學通報. 2007(02)
[7]β-葡萄糖苷酶對豆奶及豆奶粉中大豆異黃酮糖苷化合物的轉(zhuǎn)化作用研究[J]. 徐茂軍.  中國食品學報. 2005(04)
[8]β-葡萄糖苷酶在工農(nóng)醫(yī)領(lǐng)域的應用[J]. 邵金輝,韓金祥,朱有名,吳圍屏,吳堅美.  生命的化學. 2005(01)

博士論文
[1]玉米胚特異性高表達啟動子的基因組規(guī)模篩選、克隆和功能鑒定[D]. 柳小慶.中國農(nóng)業(yè)科學院 2014

碩士論文
[1]麥谷蛋白基因及甲硫氨酸亞砜還原酶基因啟動子功能分析[D]. 歐文韜.山東大學 2015



本文編號：3198437