隨著分子生物學(xué)在基因工程中的發(fā)展利用,基因工程已經(jīng)成為獲得轉(zhuǎn)基因植株的一項(xiàng)重要工具,它對(duì)當(dāng)代農(nóng)業(yè)的發(fā)展意義深遠(yuǎn)。在轉(zhuǎn)基因技術(shù)中,應(yīng)當(dāng)闡明外源基因的功能和相關(guān)調(diào)控機(jī)制,以及它們?cè)谥参镏械谋磉_(dá)位點(diǎn)和表達(dá)水平。另外由于外源基因在植物中的表達(dá)需要通過結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行調(diào)節(jié),因此鑒定外源基因的啟動(dòng)子及啟動(dòng)子上調(diào)控元件的功能是至關(guān)重要的。本實(shí)驗(yàn)室已有研究表明擬南芥β-葡萄糖苷酶19（Beta-glucosidase,BGLU19）基因啟動(dòng)子能夠驅(qū)動(dòng)外源基因在種子部位特異性表達(dá),證明它是一個(gè)種子特異性啟動(dòng)子。與此同時(shí)對(duì)At BGLU19啟動(dòng)子的全長(zhǎng)序列進(jìn)行分析,鑒定出很多與其表達(dá)相關(guān)的順式作用元件。在這些參與種子特異性表達(dá)的順式作用元件中,RY元件與種子特異性表達(dá)密切相關(guān)。綠色熒光蛋白（GFP）是一類生物發(fā)光蛋白,它可以代替GUS基因作為轉(zhuǎn)基因植物的一種分子標(biāo)記。因此在本次研究中,使用GFP基因作為報(bào)告基因,設(shè)計(jì)了At BGLU19啟動(dòng)子序列上三個(gè)RY元件的突變序列,然后通過突變引物的PCR擴(kuò)增得到了RY元件突變的啟動(dòng)子片段,繼而連接到植物表達(dá)載體上。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的浸花法將上述表達(dá)載體轉(zhuǎn)化至擬南芥中... 

【文章來源】：曲阜師范大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 β-葡萄糖苷酶(BGLU)研究進(jìn)展
        1.1.1 簡(jiǎn)介
        1.1.2 β-葡萄糖苷酶的結(jié)構(gòu)及功能研究
        1.1.3 β-葡萄糖苷酶的應(yīng)用
    1.2 植物組織特異型啟動(dòng)子
        1.2.1 組織特異型啟動(dòng)子
        1.2.2 種子特異性啟動(dòng)子相關(guān)調(diào)控元件
        1.2.3 啟動(dòng)子的研究方法
    1.3 本研究的目的及意義
    1.4 本研究的技術(shù)路線
第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 植物培養(yǎng)材料
        2.1.3 菌株和載體
        2.1.4 生化試劑、酶以及試劑盒
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.6 常用溶液、培養(yǎng)基的配制方法
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 擬南芥At BGLU19 RY元件突變啟動(dòng)子PCR擴(kuò)增
        2.2.2 擬南芥At BGLU19 啟動(dòng)子突變片段表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.3 表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        2.2.4 浸花法侵染擬南芥
        2.2.5 轉(zhuǎn)基因植株的種植
        2.2.6 轉(zhuǎn)基因植株的篩選
        2.2.7 轉(zhuǎn)基因純系擬南芥檢測(cè)GFP熒光步驟
        2.2.8 半定量RT-PCR檢測(cè)GFP表達(dá)量
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 At BGLU19 啟動(dòng)子各突變RY元件位點(diǎn)
    3.2 At BGLU19 RY元件突變啟動(dòng)子植物表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.1 At BGLU19 RY元件突變啟動(dòng)子的PCR擴(kuò)增
        3.2.2 表達(dá)載體的酶切鑒定
    3.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥純系的獲得
    3.4 GFP熒光檢測(cè)分析
        3.4.1 野生型與RY元件突變啟動(dòng)子在種子階段的GFP熒光觀察
    3.5 半定量RT-PCR檢測(cè)GFP表達(dá)量
第四章 結(jié)論與討論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]β-葡萄糖苷酶I、L-6和IL-12在診斷新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎中的應(yīng)用價(jià)值[J]. 李曉霞.  中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生. 2012(23)
[3]β-葡萄糖苷酶研究進(jìn)展[J]. 楊曉寬.  河北科技師范學(xué)院學(xué)報(bào). 2012(01)
[4]擬南芥根特異表達(dá)基因啟動(dòng)子在煙草中的表達(dá)[J]. 呂山花,孫寬瑩,樊穎倫.  西北植物學(xué)報(bào). 2011(06)
[5]種子特異性啟動(dòng)子的研究進(jìn)展[J]. 李吉濤,郭建春.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2008(04)
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[7]β-葡萄糖苷酶對(duì)豆奶及豆奶粉中大豆異黃酮糖苷化合物的轉(zhuǎn)化作用研究[J]. 徐茂軍.  中國(guó)食品學(xué)報(bào). 2005(04)
[8]β-葡萄糖苷酶在工農(nóng)醫(yī)領(lǐng)域的應(yīng)用[J]. 邵金輝,韓金祥,朱有名,吳圍屏,吳堅(jiān)美.  生命的化學(xué). 2005(01)

博士論文
[1]玉米胚特異性高表達(dá)啟動(dòng)子的基因組規(guī)模篩選、克隆和功能鑒定[D]. 柳小慶.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014

碩士論文
[1]麥谷蛋白基因及甲硫氨酸亞砜還原酶基因啟動(dòng)子功能分析[D]. 歐文韜.山東大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3198437