重組工程也叫?-Red/ET同源重組技術(shù),它是一種基于?噬菌體來源的重組酶催化DNA之間的同源重組而實現(xiàn)基因克隆與修飾的的一種基因工程操作手段。該技術(shù)實驗過程操作簡單,不需要克隆操作,不受到制性內(nèi)切酶酶切位點以及DNA分子大小的限制,可以實現(xiàn)對基因組精確修飾的目的。而單鏈寡核苷酸重組工程技術(shù)可以在基因組上實現(xiàn)多個位點的同步編輯,相比于傳統(tǒng)的重組工程更加簡便和快捷。CRISPR-Cas系統(tǒng)（成簇規(guī)律間隔的短回文重復(fù)序列和CRISPR相關(guān)蛋白）屬于細菌與古細菌在長期進化演變過程中形成的一種可以針對噬菌體的感染、質(zhì)粒接合以及轉(zhuǎn)化等基因?qū)攵纬商禺愋缘姆烙鶛C制。目前,II型CRISPR-Cas9系統(tǒng)是研究的主要焦點,也是最廣泛使用的基因編輯系統(tǒng)。該技術(shù)在基因組改造方面具有很高的編輯效率以及可編程性,現(xiàn)在已經(jīng)成為一種在實驗室中被廣泛使用的基因編輯工具。惡臭假單胞菌KT2440（Pseudomonas putida KT2440）是一種最具特征性的革蘭氏陰性假單胞菌,已經(jīng)越來越成為有價值的化合物異源表達宿主菌。而且惡臭假單胞菌KT2440具有凈化環(huán)境的作用,可以降解環(huán)境中的一些有機物,在生物技術(shù)... 

【文章來源】：南京師范大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
名詞縮寫
摘要
Abstract
第一章 綜述
    1 惡臭假單胞菌KT2440
        1.1 惡臭假單胞菌KT2440 概述
        1.2 惡臭假單胞菌KT2440 的研究進展
    2 重組
        2.1 DNA重組
        2.2 同源重組
    3 重組工程
        3.1 重組工程概述
        3.2 重組工程的作用機理
        3.3 重組工程的研究進展
        3.4 I-SceI
    4 CRISPR-Cas系統(tǒng)
        4.1 CRISPR-Cas系統(tǒng)概述
        4.2 CRISPR-Cas系統(tǒng)的分類與結(jié)構(gòu)
        4.3 CRISPR-Cas9 基因編輯系統(tǒng)
        4.4 CRISPR-Cas9 基因編輯系統(tǒng)的作用機制
        4.5 CRISPR-dCas9 調(diào)控系統(tǒng)
        4.6 CRISPR-Cas9 基因編輯假單胞菌研究進展
第二章 基于kan修復(fù)原理對P.putidaKT2440 寡核苷酸重組效率的優(yōu)化與探索
    第一節(jié) 篩選應(yīng)用于P.putida KT2440 寡核苷酸重組工程的重組酶基因
        1 實驗材料
        2 實驗方法
        3 實驗結(jié)果
    第二節(jié) 優(yōu)化P.putida KT2440 寡核苷酸重組效率
        1 實驗方法
        2 實驗結(jié)果
        3 分析與討論
第三章 寡核苷酸重組工程和CRISPR-Cas9 技術(shù)聯(lián)合介導(dǎo)的P.putida KT2440 基因組編輯
    第一節(jié) 比較應(yīng)用于P.putida KT2440 基因編輯的mkan sgRNA表達啟動子的活性
        1 實驗材料
        2 實驗方法
        3 實驗結(jié)果
    第二節(jié) 寡核苷酸重組工程和CRISPR-Cas9 聯(lián)合介導(dǎo)的P.putidaKT2440 染色體基因的點突變與敲除
        1 質(zhì)粒構(gòu)建
        2 實驗結(jié)果
        3 分析與討論
第四章 對P.putida KT2440 CRISPR-dCas9 系統(tǒng)的探索
    1 實驗材料
    2 實驗方法
    3 實驗結(jié)果
    4 分析與討論
總結(jié)
參考文獻
致謝
在讀期間發(fā)表的論文



本文編號：3197113